【第 12201 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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COR基因是植物的冷调节基因，其编码的亲水性多肽能保护细胞免受冻害，具有提高抗寒性的作用。转录因子CBF(由CBF基因控制合成)能够特异性结合下游的靶基因启动子区，激活COR基因的表达。将不同植物的COR基因和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，转入植物体内能大幅提高植物的抗寒性。在构建基因表达载体时，需要根据载体和目的基因上的限制酶切割位点选择不同的限制酶。当遇到平末端和黏性末端无法连接时，可利用Klenow酶特有的与DNA聚合酶作用相同的特性，将黏性末端补平后再与平末端连接。
(1)研究小组获取了一段包含CBF基因的长DNA片段，根据已知CBF基因序列设计了适宜长度的引物A和引物B，在PCR过程中，经过四次循环消耗引物A和引物B共________________个，引物的作用是________________________________________________________________。
(2)现有若干种限制酶，它们的识别序列和切割位点如图所示。为将COR基因表达载体和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，应选用Hed Ⅰ切割COR基因表达载体、用________________切割CBF基因的某一侧后再连接。为实现CBF基因与COR基因表达载体的另一侧连接，共需用到________________种酶。
 
(3)在转入超量表达载体的转基因植物中，转录因子CBF特异性识别下游的靶基因启动子区后，与______酶结合形成复合体，从而激活COR基因的表达。检测COR基因及其表达过程，可以采用的方法有____________________________________________________________________(至少写出两种)。
(4)科学家在培育的转基因植物中，筛选到一棵AtNUP160植株(atnup160基因的突变体)，AtNUP160基因表达产物能通过干扰核孔复合体的形成，影响RNA的出核转运，进而影响植物的抗寒性。研究发现，AtNUP160植株中CBF基因表达水平降低，影响了COR基因的表达，导致抗寒性减弱。由此推断AtNUP160植株抗寒性减弱的机理是______________________________。

 【第 12200 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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钙依赖蛋白激酶(CDPK)在植物的信号传导和提高植物抗性方面发挥着重要作用。科学家通过将CDPK基因导入拟南芥(双子叶植物)中，来获得具有抗性的新品种。如图为某种质粒表达载体和含CDPK基因的DNA片段示意图，图中标记了限制酶的切割位点。据此回答下列问题：
 
(1)通过基因工程，将CDPK基因导入拟南芥中，获得具有抗性的新品种的育种原理是____________________。为了使CDPK基因插入质粒中，应选取____________________(两种限制性内切核酸酶)分别切割质粒和含目的基因的DNA片段。
(2)利用PCR可获得大量的CDPK基因，PCR扩增的第一步：用微量移液器在微量离心管中加入缓冲液、4种脱氧核苷酸的等量混合液、水、还需要加入________________________。PCR的产物一般通过琼脂凝胶电泳来鉴定，在凝胶中的DNA分子的迁移速率与_______________有关。
(3)将CDPK基因导入拟南芥细胞通常采用的方法是_________________________________。
(4)检测CDPK基因是否成功表达的方法是______________________，若有杂交带出现，表明已产生了CDPK。

 【第 12023 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。

 

(1)构建含除草剂抗性基因的表达载体，传统的方法是目的基因通过限制酶和____________酶与载体进行重组。载体上目的基因插入位点的限制酶识别序列________(填“能”或“不能”)出现在目的基因内部，可通过________技术在目的基因两侧添加相应限制酶识别序列，以便构建表达载体。
(2)为了减少限制酶识别序列的影响，科研人员研发了新的DNA重组方法：无缝克隆技术(图2)，其中In­Fusion酶可以将任何具有相同15 bp末端序列的线性DNA分子进行连接，类似同源重组。

 

①科研人员希望应用以上方法构建含有A和GUS基因的重组DNA分子，首先获得了3种DNA分子如图3，然后混合进行In­Fusion反应。

 

 

如果引物2上额外添加的片段对应GUS基因中加粗的e片段，那么引物1和引物4上额外增加的片段分别对应载体中的片段________。完成重组反应后，将重组表达载体加入经过________处理的农杆菌中。
②为筛选成功转入重组DNA分子的菌落，可以选取引物________扩增目的基因并电泳检测。请在图4中画出阳性菌落的电泳结果。
(3)农杆菌转化愈伤组织时，用含________的选择培养基筛选转化的愈伤组织。转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织(假阳性)也可能在选择培养基上生长。已知报告基因GUS表达产物能催化无色物质K呈现蓝色，则排除假阳性的原理是：报告基因GUS在________细胞中表达，而在农杆菌中不表达，因此用无色物质K处理上述能正常生长的愈伤组织，假阳性的农杆菌________(填“出现”或“不出现”)蓝色。

 【第 11367 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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铝在土壤中常以铝酸盐的形式存在，可造成土壤酸化而影响植物生长。铝能抑制植物根尖细胞的分裂，抑制根生长，破坏根组织。部分植物能通过根部细胞膜上的苹果酸通道蛋白（ALMT）将苹果酸转运到细胞外来缓解铝毒。可将 ALMT 基因导入植物细胞，来培育转基因耐铝植物，请回答下列问题：
（1）可以从基因文库中获得 ALMT 基因，在合成 cDNA 的过程中，反应体系内加入的物质除 mRNA 和 ATP 外，还包括__________________、____________________________________。
（2）可将 ALMT 基因插入农杆菌 Ti 质粒的__________________片段中，以便目的基因进入植物细胞。利用该方法导入的目的基因的遗传一般遵循孟德尔遗传定律，原因是____________________________________。
（3）启动子是__________________特异性识别并结合的位点，能调控目的基因的表达。ALMT基因的启动子有两种类型，其中 α 启动子能使 ALMT 基因在酸性土壤的诱导下表达，β 启动子能使 ALMT 基因高效表达而无需酸性诱导。则在获得转 ALMT 基因耐铝植物时应使用___________启动子，不使用另外一种启动子的原因是______________________。

 【第 11320 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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转基因抗病香蕉的培育过程如图甲所示，图乙表示PstⅠ、SmaⅠ、EeoRⅠ和ApaⅠ四种限制酶的识别序列及酶切位点。请据图回答下列问题：