| 题型：简答题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | |  |
| 【试题】 341 | 二苯乙烯苷是我国传统药材何首乌特有的药效成分，具有抗氧化、清除自由基等功效。合成二苯乙烯苷的关键酶是芪合酶（STS），为获得大量的STS，研究人员利用质粒（如图2）将STS基因（如图1）转化到大肠杆菌细胞内进行表达。回答下列问题：
(1)采用_________技术可以快速、大量获得目的基因，据图1分析，利用该技术扩增STS基因时，应选择的引物是________。
(2)为使STS基因与质粒正确连接，需在所选引物的_______（填“3”或“5’”）端分别增加相应限制酶的酶切位点，同时选用__________两种限制酶切割质粒。
(3)启动子是_______识别和结合的部位。很多启动子具有物种特异性，在图2质粒中插入STS基因，其上游启动子应选择_______（填写字母）。
A．何首乌启动子 B．大肠杆菌启动子 C．农杆菌启动子
(4)可将转化后的大肠杆菌接种到含________的培养基上进行筛选。能在该培养基上生长的大肠杆菌是否一定含有STS基因?请判断并说明理由：________。
(5)科研人员利用相关技术替换了STS某个位点的氨基酸，提高了STS的抗氧化能力，该技术属于_________。  【第 12037 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
【参考答案】(1)PCR 引物2 和引物 3
(2)5' XhoI和 NdeI
(3)RNA聚合酶 B
(4)氨苄青霉素 不一定，含氨苄青霉素抗性基因的未重组载体(空质粒)也可导入大肠杆菌，使大肠杆菌在培养基上形成菌落
(5)蛋白质工程
二苯乙烯苷是我国传统药材何首乌特有的药效成分，具有抗氧化、清除自由基等功效。合成二苯乙烯苷的关键酶是芪合酶（STS），为获得大量的STS，研究人员利用质粒（如图2）将STS基因（如图1）转化到大肠杆菌细胞内进行表达。回答下列问题：
(1)采用_________技术可以快速、大量获得目的基因，据图1分析，利用该技术扩增STS基因时，应选择的引物是________。
(2)为使STS基因与质粒正确连接，需在所选引物的_______（填“3”或“5’”）端分别增加相应限制酶的酶切位点，同时选用__________两种限制酶切割质粒。
(3)启动子是_______识别和结合的部位。很多启动子具有物种特异性，在图2质粒中插入STS基因，其上游启动子应选择_______（填写字母）。
A．何首乌启动子 B．大肠杆菌启动子 C．农杆菌启动子
(4)可将转化后的大肠杆菌接种到含________的培养基上进行筛选。能在该培养基上生长的大肠杆菌是否一定含有STS基因?请判断并说明理由：________。
(5)科研人员利用相关技术替换了STS某个位点的氨基酸，提高了STS的抗氧化能力，该技术属于_________。
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| 题型：单选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 342 | 乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量；酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为通过双酶切构建重组质粒的过程。GTG为原核生物偏好的起始密码子编码序列，ATG为真核生物偏好的起始密码子编码序列。下列说法正确的是
A．引物2的3'端序列应包含XbaI的识别序列
B．重组质粒以能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体
C．PCR反应时，缓冲液中一般要添加Ca 2+来激活相关酶
D．引物1的5'端序列应考虑将GTG改为ATG 【第 12036 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量；酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为通过双酶切构建重组质粒的过程。GTG为原核生物偏好的起始密码子编码序列，ATG为真核生物偏好的起始密码子编码序列。下列说法正确的是
A．引物2的3'端序列应包含XbaI的识别序列
B．重组质粒以能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体
C．PCR反应时，缓冲液中一般要添加Ca2+来激活相关酶
D．引物1的5'端序列应考虑将GTG改为ATG
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| 题型：单选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 343 | 脱氧核苷三磷酸（dNTP）和双脱氧核苷三磷酸（ddNTP、ddN—Pα~Pβ~Pγ）结构类似，两者的区别是ddNTP脱氧核糖第3位碳原子上的羟基被氢原子取代。DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。现有一些序列为5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子单链片段，拟通过PCR获得被32P标记且3’端为碱基A的不同长度的子链DNA。在反应管中加入单链模板、引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+及缓冲溶液。下列叙述正确的是
A．反应底物是dCTP、dGTP、dTTP和γ位32P标记的ddATP
B．TaqDNA聚合酶催化磷酸二酯键的形成，并需要Mg2+激活
C．ddNTP与dNTP竞争脱氧核苷酸链的3’末端和5’末端
D．实验中可得到4种不同长度被32P标记且3’端为碱基A的子链DNA
【第 12035 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
脱氧核苷三磷酸（dNTP）和双脱氧核苷三磷酸（ddNTP、ddN—Pα~Pβ~Pγ）结构类似，两者的区别是ddNTP脱氧核糖第3位碳原子上的羟基被氢原子取代。DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。现有一些序列为5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子单链片段，拟通过PCR获得被32P标记且3’端为碱基A的不同长度的子链DNA。在反应管中加入单链模板、引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+及缓冲溶液。下列叙述正确的是
A．反应底物是dCTP、dGTP、dTTP和γ位32P标记的ddATP
B．TaqDNA聚合酶催化磷酸二酯键的形成，并需要Mg2+激活
C．ddNTP与dNTP竞争脱氧核苷酸链的3’末端和5’末端
D．实验中可得到4种不同长度被32P标记且3’端为碱基A的子链DNA
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| 题型：单选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 344 | 为研究玉米的抗逆机制，科研人员利用图中的双分子荧光互补技术分析玉米M5与B72蛋白的相互作用。下列说法正确的是
A．直接将YFP剪切为N端和C端后，分别与M5和B72蛋白连接
B．设计特异性引物以玉米cDNA为模板扩增M5和B72基因
C．将M5和B72基因融合后连接到质粒上的YFP基因中
D．将含有M5和B72的基因表达载体分别导入不同细胞中 【第 12034 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
为研究玉米的抗逆机制，科研人员利用图中的双分子荧光互补技术分析玉米M5与B72蛋白的相互作用。下列说法正确的是
A．直接将YFP剪切为N端和C端后，分别与M5和B72蛋白连接
B．设计特异性引物以玉米cDNA为模板扩增M5和B72基因
C．将M5和B72基因融合后连接到质粒上的YFP基因中
D．将含有M5和B72的基因表达载体分别导入不同细胞中 |
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| 题型：简答题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 345 | 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒上相关限制酶的酶切位点如图甲所示，电泳检测结果如图乙所示。回答下列问题：
(1)操作过程中需要用到的工具有___________，构建表达载体时应选用_____________这两种限制酶处理质粒。
(2)为保证通过mRNA逆转录获得的光敏色素基因A和质粒的充分连接，一般需要在该基因上、下游引物的___________端分别添加酶切位点。一般在这两部位添加不同的酶切位点，主要目的是___________。
(3)A同学认为仅由图乙电泳结果不能确定1、3、4号转基因棉花均培育成功，理由是_________。
(4)在生物学领域，对光敏色素进行分子改造使用的技术是蛋白质工程。获得光敏色素分子的基本途径为：____________→设计预期的光敏色素的分子结构→推测应有的___________→找到相对应的脱氧核苷酸序列。 【第 12033 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
【参考答案】(1)限制性内切核酸酶(限制酶)、DNA连接酶和载体BcI和HindⅢ
(2)5'使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连
(3)由图乙可知1、3、4号均成功导入光敏色素基因A，但转基因棉花是否培育成功还需要进行生物个体水平上的鉴定
(4) 预期的光敏色素的功能 氨基酸序列
光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒上相关限制酶的酶切位点如图甲所示，电泳检测结果如图乙所示。回答下列问题：
(1)操作过程中需要用到的工具有___________，构建表达载体时应选用_____________这两种限制酶处理质粒。
(2)为保证通过mRNA逆转录获得的光敏色素基因A和质粒的充分连接，一般需要在该基因上、下游引物的___________端分别添加酶切位点。一般在这两部位添加不同的酶切位点，主要目的是___________。
(3)A同学认为仅由图乙电泳结果不能确定1、3、4号转基因棉花均培育成功，理由是_________。
(4)在生物学领域，对光敏色素进行分子改造使用的技术是蛋白质工程。获得光敏色素分子的基本途径为：____________→设计预期的光敏色素的分子结构→推测应有的___________→找到相对应的脱氧核苷酸序列。
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 346 | 水蛭素是一种可用于预防和治疗血栓的蛋白质。若用赖氨酸（密码子为AAA、AAG）替换水蛭素第47位的天冬酰胺（密码子为AAC、AAU）后可以提高它的抗凝血活性。某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因的第47位点引入特定突变后（原理见图），合成了大量抗凝血活性增强的水蛭素。下列相关叙述正确的是
A．若原基因拟突变位点的碱基对为A-T，则让其突变为T-A后即能达到目的
B．除图示物质外，过程②、③和⑤还需提供含Mg2+的缓冲液、热稳定性DNA聚合酶和4种脱氧核苷酸
C．过程②和③可在同一反应容器内同时进行，过程⑤的引物可使用引物1和引物4
D．突变后的水蛭素基因需要与载体结合，并将其导入受体细胞内进行表达，才能获得相应的蛋白质产品 【第 12032 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
水蛭素是一种可用于预防和治疗血栓的蛋白质。若用赖氨酸（密码子为AAA、AAG）替换水蛭素第47位的天冬酰胺（密码子为AAC、AAU）后可以提高它的抗凝血活性。某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因的第47位点引入特定突变后（原理见图），合成了大量抗凝血活性增强的水蛭素。下列相关叙述正确的是
A．若原基因拟突变位点的碱基对为A-T，则让其突变为T-A后即能达到目的
B．除图示物质外，过程②、③和⑤还需提供含Mg2+的缓冲液、热稳定性DNA聚合酶和4种脱氧核苷酸
C．过程②和③可在同一反应容器内同时进行，过程⑤的引物可使用引物1和引物4
D．突变后的水蛭素基因需要与载体结合，并将其导入受体细胞内进行表达，才能获得相应的蛋白质产品
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 347 | 亚洲棉的突变型光籽和野生型毛籽是-对相对性状，研究发现，亚洲棉某突变体的光籽表型与8号染色体的~880kb至~903kb区间相关，研究人员根据野生型毛籽棉的该区间设计连续的重叠引物进行PCR，产物扩增结果如图所示，下列说法正确的是
A．应提取该突变体和野生型亚洲棉的全部染色体DNA进行PCR
B．上图中PCR产物的鉴定是通过琼脂糖凝胶电泳来进行的
C．据图分析可知，分子量较大的扩增产物与点样处的距离较小
D．该突变体出现的根本原因是第6对引物对应区间发生了基因突变 【第 12031 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
亚洲棉的突变型光籽和野生型毛籽是-对相对性状，研究发现，亚洲棉某突变体的光籽表型与8号染色体的~880kb至~903kb区间相关，研究人员根据野生型毛籽棉的该区间设计连续的重叠引物进行PCR，产物扩增结果如图所示，下列说法正确的是
A．应提取该突变体和野生型亚洲棉的全部染色体DNA进行PCR
B．上图中PCR产物的鉴定是通过琼脂糖凝胶电泳来进行的
C．据图分析可知，分子量较大的扩增产物与点样处的距离较小
D．该突变体出现的根本原因是第6对引物对应区间发生了基因突变
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 348 | 蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应的DM片段结构示意图，其中14表示A上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述错误的是
A．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏2个磷酸二酯键
B．若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、4分别是2种引物结合的位置
C．若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca2+处理，更利于实现转化
D．在PCR扩增仪中根据选定的引物至少需经过7次循环才可获得32个两条链等长的目的基因片段 【第 12030 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应的DM片段结构示意图，其中14表示A上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述错误的是
A．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏2个磷酸二酯键
B．若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、4分别是2种引物结合的位置
C．若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca2+处理，更利于实现转化
D．在PCR扩增仪中根据选定的引物至少需经过7次循环才可获得32个两条链等长的目的基因片段
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 349 | IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿的IKKβ基因编码区第1183位碱基T突变为C．为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术获得突变基因，如图所示。下列说法正确的是
A．PCR1中使用的引物有引物A、引物C
B．PCR2中使用的引物有引物B、大引物a
C．PCR1过程需要扩增3轮才能获得目标产物
D．PCR2过程中，为减少错误DNA片段的产生可适当升高复性温度 【第 12029 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿的IKKβ基因编码区第1183位碱基T突变为C．为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术获得突变基因，如图所示。下列说法正确的是
A．PCR1中使用的引物有引物A、引物C
B．PCR2中使用的引物有引物B、大引物a
C．PCR1过程需要扩增3轮才能获得目标产物
D．PCR2过程中，为减少错误DNA片段的产生可适当升高复性温度
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 350 | 重叠延伸PCR技术是设计含突变点的互补核苷酸片段作为引物，在PCR过程中，互补的核苷酸片段形成重叠，重叠的部分互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得突变基因的方法。科研人员将枯草芽孢杆菌的甘油激酶的第270位氨基酸M突变为1，构建出了对甘油高效利用的枯草芽孢杆菌。下列说法正确的是
A．通过PCR1获得产物AB需要进行2轮PCR扩增
B．无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD
C．在同一反应体系中加入四种引物可以同时获得大量产物AB和CD
D．获取目的基因后，构建质粒载体，形成基因表达载体。基因表达载体上保证其能在宿主细胞中扩增的结构是复制原点，保证目的基因能正常转录的结构是启动子和终止子 【第 12028 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
重叠延伸PCR技术是设计含突变点的互补核苷酸片段作为引物，在PCR过程中，互补的核苷酸片段形成重叠，重叠的部分互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得突变基因的方法。科研人员将枯草芽孢杆菌的甘油激酶的第270位氨基酸M突变为1，构建出了对甘油高效利用的枯草芽孢杆菌。下列说法正确的是
A．通过PCR1获得产物AB需要进行2轮PCR扩增
B．无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD
C．在同一反应体系中加入四种引物可以同时获得大量产物AB和CD
D．获取目的基因后，构建质粒载体，形成基因表达载体。基因表达载体上保证其能在宿主细胞中扩增的结构是复制原点，保证目的基因能正常转录的结构是启动子和终止子
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