【第 12332 题】 【题型】：单选题 【章节】：第4节 蛋白质工程的原理和应用  
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大引物PCR定点突变常用来研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变需进行两轮PCR反应即可获得,过程如图所示。下列叙述不正确的
 
A.第一轮PCR过程中复性所用的温度与第二轮PCR复性的温度不一样
B. PCR扩增的定点诱变产物通常需要连接到载体分子上才能表达出相应的性状,该定点诱变产物需具备启动子、终止子等结构才能进行转录和翻译

C.第二轮PCR所用的引物是第一轮PCR的产物DNA的两条链

 【第 12331 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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减少引物与模板之间的非特异性配对，人们对普通PCR技术进行改良，发明了巢式PCR，原理是利用两套引物进行两轮PCR扩增。首先利用第一对引物（外引物）对目的基因所在的DNA进行第一轮扩增，第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板，利用第二对引物（内引物或巢式引物）结合在第一轮扩增产物内部，经过15～30次循环，获得第二轮扩增片段（即目的基因），最终第二轮扩增片段短于第一轮，基本过程如图所示。下列叙述错误的是

 【第 12330 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除𝑇𝑎𝑞DNA聚合酶以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有
A. 𝑇𝑎𝑞酶最适催化温度范围为50∼60℃ 
B.与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物
C.两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸
D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了𝑇𝑎𝑞酶的特异性

 【第 12329 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是 

A.增加模板DNA的量

 【第 12328 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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番木瓜很容易感染番木瓜环斑病毒（英文缩写为PRSV），该病毒是生产番木瓜的限制因素。我国科研人员利用农杆菌转化法，将番木瓜环斑病毒株系Ys的复制酶基因转入番木瓜，成功培育出转基因番木瓜“华农一号”。其大致流程如图所示。回答下列问题：
 
（1） 过程①称为___________；选用Ti质粒作为载体，是因为__________________。为让Ys的复制酶基因定向插入Ti质粒上，需在Ys的复制酶基因两端分别添加限制酶__________________的酶切位点。
（2） 过程③将重组质粒转入农杆菌之前，需先用__________________ 处理农杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态；为筛选出含重组质粒的农杆菌，应将转化的农杆菌培养在含卡那霉素的培养基上。过程⑤运用的生物技术利用的生物学原理是___________________________。
（3） 若要从个体生物学水平鉴定培育的转基因番木瓜植株是否具有抗番木瓜环斑病毒的特性，应进行的操作是___________________________。
（4） 番木瓜是直接供人们食用的转基因水果，一直以来也是转基因安全性争议的焦点之一。对于转基因食品的安全性，公众主要担心的是___________________________。

 【第 12327 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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下图为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图中Amp^R为氨苄青霉素抗性基因，Tet^R为四环素抗性基因，LacZ为蓝色显色基因，其表达产物可以将无色化合物X-gal转化成蓝色物质，使大肠杆菌的菌落呈蓝色，否则菌落为白色。EcoRⅠ、PvuⅠ为两种限制酶，质粒上限制酶后的括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。请回答：
  
（1） 利用PCR技术对一个目的基因扩增n次，需要___________对引物，耐高温的DNA聚合酶能从引物的______ 端开始连接脱氧核苷酸，从而获得大量目的基因D。
（2） 据图分析，质粒A、C不能作为目的基因D的载体，理由分别是______________________。
将目的基因D与质粒B进行重组，应该选用限制酶___________和DNA连接酶。
（3） 在基因工程的操作过程中，需要检查目的基因D是否重组到质粒中，使用EcoRⅠ处理重组质粒，完全酶切后，进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.6kb和3.1kb，或者___________kb和___________kb的片段，则可判断质粒B已与目的基因D重组成功。
（4） 利用自身不含LacZ基因且对抗生素敏感的大肠杆菌作为受体细胞，要在已转化的含重组质粒、已转化的含空质粒的受体细胞和未转化成功的细胞中，筛选出已转化的含重组质粒的受体细胞，方法是在含有______________________的培养基上培养，形成白色菌落的为导入重组质粒的受体细胞。

 【第 12326 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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用农杆菌侵染水稻（二倍体）细胞，获得1条染色体上R基因被插入T-DNA的个体T0。T-DNA插入基因的位置如图1所示。T0自交得T1，用P1、P2、P3为引物检测不同T1个体的基因组成情况，如图2所示。图1箭头方向为引物所在子链的延伸方向；R基因被T-DNA插入后，用P1、P2为引物无法完成PCR。下列叙述错误的是
 
A. 该实验中所用的引物P1、P2、P3为短双链核酸
B. R基因被T-DNA插入后导致基因被破坏，可能无法表达相应蛋白
C. 用P1、P2引物进行PCR得到产物的个体均为R基因纯合子
D. 若调查样本量足够大，W、H、M个体的比例约为1:2:1

 【第 12325 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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胆汁盐水解酶(BSH)对治疗小鼠糖尿病有明显的效果。天然大肠杆菌对外来DNA的入侵具有一定的抵抗力。科研人员从实验小鼠的粪便样本中提取出一种遗传上易驯化（对DNA入侵抵抗力弱）的大肠杆菌菌株M，构建BSH基因的表达载体（如下图）并导入菌株M体内，再将菌株M重新导入小鼠肠道。一段时间后，在小鼠的肠道中出现了能持续分泌BSH的大肠杆菌，小鼠糖尿病症状得到缓解。下列叙述错误的是
 
A. 天然大肠杆菌对外来DNA的入侵具有一定抵抗力，可能与细胞内的限制酶有关
B. 构建基因表达载体时，应该选用限制酶B和限制酶C切割质粒和目的基因
C. 转化前常用Ca²⁺处理大肠杆菌，使其处于能吸收外源DNA分子的状态
D. 将转基因菌株M导入小鼠肠道后，BSH基因在其肠道细胞中稳定复制并表达

 【第 12324 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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CRISPR/Cas9是一种由RNA指导的，利用Cas9核酸酶对靶向基因进行编辑的技术。CRISPR本质是基因组DNA上的一段特殊序列，它广泛存在于原核生物基因组中，是细菌和古细菌为应对病毒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制，而Cas9则是CRISPR相关核酸酶。该技术原理是一条单链向导RNA引导核酸酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。具体过程是通过设计“向导”RNA中20个碱基的识别序列，实现对目标DNA上某个特定位置的切割或特定DNA片段的添加，如下图所示。下列相关叙述正确的是
 
A. Cas9相当于基因工程中的限制酶，具有识别特定脱氧核苷酸序列并使每一条链中特定部位断开的功能
B. 若用Cas9切开后添加特定的DNA片段，需要DNA聚合酶和DNA连接酶
C. “向导”RNA可在解旋酶和RNA聚合酶的催化下合成
D. Cas9能通过专一性破坏双链DNA分子中的磷酸二酯键来切割DNA分子

 【第 12323 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板进行PCR，扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T-DNA插入的具体位置。下列说法错误的是