【第 12328 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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番木瓜很容易感染番木瓜环斑病毒（英文缩写为PRSV），该病毒是生产番木瓜的限制因素。我国科研人员利用农杆菌转化法，将番木瓜环斑病毒株系Ys的复制酶基因转入番木瓜，成功培育出转基因番木瓜“华农一号”。其大致流程如图所示。回答下列问题：
 
（1） 过程①称为___________；选用Ti质粒作为载体，是因为__________________。为让Ys的复制酶基因定向插入Ti质粒上，需在Ys的复制酶基因两端分别添加限制酶__________________的酶切位点。
（2） 过程③将重组质粒转入农杆菌之前，需先用__________________ 处理农杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态；为筛选出含重组质粒的农杆菌，应将转化的农杆菌培养在含卡那霉素的培养基上。过程⑤运用的生物技术利用的生物学原理是___________________________。
（3） 若要从个体生物学水平鉴定培育的转基因番木瓜植株是否具有抗番木瓜环斑病毒的特性，应进行的操作是___________________________。
（4） 番木瓜是直接供人们食用的转基因水果，一直以来也是转基因安全性争议的焦点之一。对于转基因食品的安全性，公众主要担心的是___________________________。

 【第 12327 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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下图为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图中Amp^R为氨苄青霉素抗性基因，Tet^R为四环素抗性基因，LacZ为蓝色显色基因，其表达产物可以将无色化合物X-gal转化成蓝色物质，使大肠杆菌的菌落呈蓝色，否则菌落为白色。EcoRⅠ、PvuⅠ为两种限制酶，质粒上限制酶后的括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。请回答：
  
（1） 利用PCR技术对一个目的基因扩增n次，需要___________对引物，耐高温的DNA聚合酶能从引物的______ 端开始连接脱氧核苷酸，从而获得大量目的基因D。
（2） 据图分析，质粒A、C不能作为目的基因D的载体，理由分别是______________________。
将目的基因D与质粒B进行重组，应该选用限制酶___________和DNA连接酶。
（3） 在基因工程的操作过程中，需要检查目的基因D是否重组到质粒中，使用EcoRⅠ处理重组质粒，完全酶切后，进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.6kb和3.1kb，或者___________kb和___________kb的片段，则可判断质粒B已与目的基因D重组成功。
（4） 利用自身不含LacZ基因且对抗生素敏感的大肠杆菌作为受体细胞，要在已转化的含重组质粒、已转化的含空质粒的受体细胞和未转化成功的细胞中，筛选出已转化的含重组质粒的受体细胞，方法是在含有______________________的培养基上培养，形成白色菌落的为导入重组质粒的受体细胞。

 【第 12201 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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COR基因是植物的冷调节基因，其编码的亲水性多肽能保护细胞免受冻害，具有提高抗寒性的作用。转录因子CBF(由CBF基因控制合成)能够特异性结合下游的靶基因启动子区，激活COR基因的表达。将不同植物的COR基因和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，转入植物体内能大幅提高植物的抗寒性。在构建基因表达载体时，需要根据载体和目的基因上的限制酶切割位点选择不同的限制酶。当遇到平末端和黏性末端无法连接时，可利用Klenow酶特有的与DNA聚合酶作用相同的特性，将黏性末端补平后再与平末端连接。
(1)研究小组获取了一段包含CBF基因的长DNA片段，根据已知CBF基因序列设计了适宜长度的引物A和引物B，在PCR过程中，经过四次循环消耗引物A和引物B共________________个，引物的作用是________________________________________________________________。
(2)现有若干种限制酶，它们的识别序列和切割位点如图所示。为将COR基因表达载体和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，应选用Hed Ⅰ切割COR基因表达载体、用________________切割CBF基因的某一侧后再连接。为实现CBF基因与COR基因表达载体的另一侧连接，共需用到________________种酶。
 
(3)在转入超量表达载体的转基因植物中，转录因子CBF特异性识别下游的靶基因启动子区后，与______酶结合形成复合体，从而激活COR基因的表达。检测COR基因及其表达过程，可以采用的方法有____________________________________________________________________(至少写出两种)。
(4)科学家在培育的转基因植物中，筛选到一棵AtNUP160植株(atnup160基因的突变体)，AtNUP160基因表达产物能通过干扰核孔复合体的形成，影响RNA的出核转运，进而影响植物的抗寒性。研究发现，AtNUP160植株中CBF基因表达水平降低，影响了COR基因的表达，导致抗寒性减弱。由此推断AtNUP160植株抗寒性减弱的机理是______________________________。

 【第 12200 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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钙依赖蛋白激酶(CDPK)在植物的信号传导和提高植物抗性方面发挥着重要作用。科学家通过将CDPK基因导入拟南芥(双子叶植物)中，来获得具有抗性的新品种。如图为某种质粒表达载体和含CDPK基因的DNA片段示意图，图中标记了限制酶的切割位点。据此回答下列问题：
 
(1)通过基因工程，将CDPK基因导入拟南芥中，获得具有抗性的新品种的育种原理是____________________。为了使CDPK基因插入质粒中，应选取____________________(两种限制性内切核酸酶)分别切割质粒和含目的基因的DNA片段。
(2)利用PCR可获得大量的CDPK基因，PCR扩增的第一步：用微量移液器在微量离心管中加入缓冲液、4种脱氧核苷酸的等量混合液、水、还需要加入________________________。PCR的产物一般通过琼脂凝胶电泳来鉴定，在凝胶中的DNA分子的迁移速率与_______________有关。
(3)将CDPK基因导入拟南芥细胞通常采用的方法是_________________________________。
(4)检测CDPK基因是否成功表达的方法是______________________，若有杂交带出现，表明已产生了CDPK。

 【第 12037 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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二苯乙烯苷是我国传统药材何首乌特有的药效成分，具有抗氧化、清除自由基等功效。合成二苯乙烯苷的关键酶是芪合酶（STS），为获得大量的STS，研究人员利用质粒（如图2）将STS基因（如图1）转化到大肠杆菌细胞内进行表达。回答下列问题：