第2节 基因工程的基本操作程序
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荧光 PCR 法根据化学发光原理可以分为染料法和探针法。染料法中特殊染料本身不发光,但是当PCR 扩增的时候,染料能够与DNA双链结合从而发光,如图1所示。探针法中除了引物外另外设置了一个探针,在探针的两端分别带上发光基团和淬灭基团,此时发光基团并不发光,但是当DNA通过引物合成的时候,探针被酶切降解释放出发光基团和淬灭基团,两种基团分开后产生荧光,如图2所示。下列说法正确的是
A.两种方法均可用于目标 DNA 的定量分析
B.与染料法相比,探针法的特异性更强
C.通过适当延长引物长度和降低复性温度可提高荧光PCR的特异性
D.用荧光 PCR 法检测人体是否感染新冠病毒前需要先进行逆转录
【多选题】热启动PCR可提高扩增效率,方法之一是:先将除𝑇𝑎𝑞DNA聚合酶以外的各成分混合后,加热到80℃以上再混入酶,然后直接从94℃开始PCR扩增,下列叙述正确的有
A. 𝑇𝑎𝑞酶最适催化温度范围为50∼60℃
B.与常规PCR相比,热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物
C.两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸
D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了𝑇𝑎𝑞酶的特异性
A. 𝑇𝑎𝑞酶最适催化温度范围为50∼60℃
B.与常规PCR相比,热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物
C.两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸
D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了𝑇𝑎𝑞酶的特异性
【多选题】用农杆菌侵染水稻(二倍体)细胞,获得1条染色体上R基因被插入T-DNA的个体T0。T-DNA插入基因的位置如图1所示。T0自交得T1,用P1、P2、P3为引物检测不同T1个体的基因组成情况,如图2所示。图1箭头方向为引物所在子链的延伸方向;R基因被T-DNA插入后,用P1、P2为引物无法完成PCR。下列叙述错误的是
A. 该实验中所用的引物P1、P2、P3为短双链核酸
B. R基因被T-DNA插入后导致基因被破坏,可能无法表达相应蛋白
C. 用P1、P2引物进行PCR得到产物的个体均为R基因纯合子
D. 若调查样本量足够大,W、H、M个体的比例约为1:2:1
A. 该实验中所用的引物P1、P2、P3为短双链核酸
B. R基因被T-DNA插入后导致基因被破坏,可能无法表达相应蛋白
C. 用P1、P2引物进行PCR得到产物的个体均为R基因纯合子
D. 若调查样本量足够大,W、H、M个体的比例约为1:2:1
【多选题】如图为DNaseI (一种消化DNA的内切核酸酶)足迹法示意图,该方法可鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上的结合位点,下列有关叙述正确的是
A.DNaseI作用于DNA的氢键和磷酸二酯键
B.加入的蛋白质可保护相应DNA序列不受DNaseI攻击
C.图中①处的空白区域是蛋白质与DNA结合后留下的“足迹”
D.该方法可找到与特异性DNA结合的目标蛋白且能确定目标蛋白结合的碱基
A.DNaseI作用于DNA的氢键和磷酸二酯键
B.加入的蛋白质可保护相应DNA序列不受DNaseI攻击
C.图中①处的空白区域是蛋白质与DNA结合后留下的“足迹”
D.该方法可找到与特异性DNA结合的目标蛋白且能确定目标蛋白结合的碱基
【多选题】下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A,也不含质粒A上的基因。下列说法正确的是
A.在含有四环素的培养基上,能生长的就是导入了质粒A的细菌
B.在含氨苄青霉素的培养基上,能生长的是导入了重组质粒的细菌
C.在含氨苄青霉素的培养基上能生长,但在含四环素的培育基不能生长的细菌是导入了重组质粒的细菌
D.目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长
A.在含有四环素的培养基上,能生长的就是导入了质粒A的细菌
B.在含氨苄青霉素的培养基上,能生长的是导入了重组质粒的细菌
C.在含氨苄青霉素的培养基上能生长,但在含四环素的培育基不能生长的细菌是导入了重组质粒的细菌
D.目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长