【多选题】D基因中含两种限制酶BamHⅠ和Msp Ⅰ (5′C↓CGG3′)的酶切位点，Hpa Ⅱ和Msp Ⅰ酶切位点相同，酶切位点处的胞嘧啶可能被甲基化，Hpa Ⅱ对胞嘧啶甲基化敏感(即不能切割甲基化的酶切位点)，而Msp Ⅰ对胞嘧啶甲基化不敏感。某种基因型小鼠(Dd)有表型1和表型2两种表型，利用两种表型的小鼠D基因做了三组酶切实验：第一组单独使用BamHⅠ，第二组使用BamHⅠ＋Msp Ⅰ，第三组使用BamHⅠ＋Hpa Ⅱ；每组完全酶切产物(每一个酶切位点均被切割)通过电泳分离并使用探针得到杂交带，结果如图所示。下列叙述正确的是
 
A．该种小鼠(Dd)有两种表型可能与D基因甲基化程度不同影响了基因的表达有关
B．若经过第一组处理后均可得到8.9kb的基因片段(包含探针)，则说明经过第一组处理后的D基因的酶切位点均没有被甲基化
C．若控制表型1的D基因经过第二组和第三组处理后的酶切结果分别是3.5 kb和8.9 kb，则说明控制表型1的D基因中的4个Msp Ⅰ酶切位点均被甲基化
D．若控制表型2的D基因经过第三组处理后的酶切结果介于3.5kb和8.9kb之间，则说明D基因中最多有3个Hpa Ⅱ酶切位点被甲基化

【简答题】COR基因是植物的冷调节基因，其编码的亲水性多肽能保护细胞免受冻害，具有提高抗寒性的作用。转录因子CBF(由CBF基因控制合成)能够特异性结合下游的靶基因启动子区，激活COR基因的表达。将不同植物的COR基因和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，转入植物体内能大幅提高植物的抗寒性。在构建基因表达载体时，需要根据载体和目的基因上的限制酶切割位点选择不同的限制酶。当遇到平末端和黏性末端无法连接时，可利用Klenow酶特有的与DNA聚合酶作用相同的特性，将黏性末端补平后再与平末端连接。
(1)研究小组获取了一段包含CBF基因的长DNA片段，根据已知CBF基因序列设计了适宜长度的引物A和引物B，在PCR过程中，经过四次循环消耗引物A和引物B共__________个，引物的作用是________________________________________。
(2)现有若干种限制酶，它们的识别序列和切割位点如图所示。为将COR基因表达载体和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，应选用Hed Ⅰ切割COR基因表达载体、用__________切割CBF基因的某一侧后再连接。为实现CBF基因与COR基因表达载体的另一侧连接，共需用到__________种酶。
 
(3)在转入超量表达载体的转基因植物中，转录因子CBF特异性识别下游的靶基因启动子区后，与______酶结合形成复合体，从而激活COR基因的表达。检测COR基因及其表达过程，可以采用的方法有____________________________________________(至少写出两种)。
(4)科学家在培育的转基因植物中，筛选到一棵AtNUP160植株(atnup160基因的突变体)，AtNUP160基因表达产物能通过干扰核孔复合体的形成，影响RNA的出核转运，进而影响植物的抗寒性。研究发现，AtNUP160植株中CBF基因表达水平降低，影响了COR基因的表达，导致抗寒性减弱。由此推断AtNUP160植株抗寒性减弱的机理是_____________________。

【简答题】钙依赖蛋白激酶(CDPK)在植物的信号传导和提高植物抗性方面发挥着重要作用。科学家通过将CDPK基因导入拟南芥(双子叶植物)中，来获得具有抗性的新品种。如图为某种质粒表达载体和含CDPK基因的DNA片段示意图，图中标记了限制酶的切割位点。据此回答下列问题：
 
(1)通过基因工程，将CDPK基因导入拟南芥中，获得具有抗性的新品种的育种原理是______________。为了使CDPK基因插入质粒中，应选取______________(两种限制性内切核酸酶)分别切割质粒和含目的基因的DNA片段。
(2)利用PCR可获得大量的CDPK基因，PCR扩增的第一步：用微量移液器在微量离心管中加入缓冲液、4种脱氧核苷酸的等量混合液、水、还需要加入_______________。PCR的产物一般通过琼脂凝胶电泳来鉴定，在凝胶中的DNA分子的迁移速率与____________有关。
(3)将CDPK基因导入拟南芥细胞通常采用的方法是_____________________。
(4)检测CDPK基因是否成功表达的方法是________________，若有杂交带出现，表明已产生了CDPK。

【多选题】如图为DNaseI (一种消化DNA的内切核酸酶)足迹法示意图，该方法可鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上的结合位点，下列有关叙述正确的是
 
A．DNaseI作用于DNA的氢键和磷酸二酯键
B．加入的蛋白质可保护相应DNA序列不受DNaseI攻击
C．图中①处的空白区域是蛋白质与DNA结合后留下的“足迹”
D．该方法可找到与特异性DNA结合的目标蛋白且能确定目标蛋白结合的碱基

【多选题】下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。下列说法正确的是
 
A．在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌
B．在含氨苄青霉素的培养基上，能生长的是导入了重组质粒的细菌
C．在含氨苄青霉素的培养基上能生长，但在含四环素的培育基不能生长的细菌是导入了重组质粒的细菌
D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长