第2节 基因工程的基本操作程序专项练习

荧光定量PCR技术可定量检测样本中DNA含量，用于病毒检测。其原理是在PCR反应体系中加入引物的同时，加入与某条模板链互补的荧光探针。当耐高温的DNA聚合酶催化子链延伸至探针处会水解探针，使荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一次，就有一个荧光分子生成(如图)。通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值(荧光信号达到设定阈值时所经历的循环次数)。下列相关叙述错误的是
 
A．PCR每个循环包括变性、复性(引物和模板结合)、延伸3个阶段
B．耐高温的DNA聚合酶在该反应中的作用是形成磷酸二酯键
C．最终监测的荧光强度与起始时反应管内样本DNA的含量呈正相关
D．Ct值越大表示被检测样本中病毒数目越多，患者危险性更高

限制酶BamHI和BglⅡ是两种常见的工具酶，它们的识别序列及切割位点依次为G↓GATCC和A↓GATCT。研究中用BamHI切割DNA获得目的基因，用BglⅡ切割质粒，并连接得到重组质粒，下列相关叙述错误的是
A.酶切过程中，需控制好酶浓度、温度和反应时间等因素

B.目的基因经限制酶BamHI切割后形成的黏性末端是-CTAG-

C.分别用两种限制酶切割，保证了目的基因定向插入质粒

某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是 

A.增加模板DNA的量

B.延长热变性的时间

C.延长延伸的时间

D.提高复性的温度

临床上可采用PCR和DNA反向点杂交相结合的检测技术对HPV基因进行分型,过程如下:设计出针对已知有致癌风险的23种HPV基因的特异性引物并标记上会发生显色反应的生物素,通过 PCR对待测样本 DNA进行扩增,再将扩增产物直接与固定在膜上的分型基因探针(包括17种高危型和6种低危型)进行杂交。经显色处理后,与固定化探针结合的HPV基因就会在相应位置产生显色反应,从而判断待测样本是否被含有这些HPV基因的病毒感染。有关说法错误的是
A.生物素应标记在引物的5'端
B.该检测技术需要对扩增的DNA样本进行琼脂糖凝胶电泳
C.该检测技术具有高度的特异性,能够准确地区分不同类型的HPV病毒
D.反向点杂交是通过分型基因探针与扩增的目的片段碱基互补配对结合在起的

重叠延伸PCR可实现定点基因诱变，其操作过程如图所示(凸起处代表突变位点)。下列说法正确的是
 
A．过程①需要把两对引物同时加入一个扩增体系以提高扩增效率
B．过程①需要2轮PCR才能得到图中所示PCR产物
C．过程②的产物都可以完成延伸过程
D．若过程④得到16个突变基因则需要消耗15个通用引物RP2

“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。下列叙述错误的是
 
A．第一轮复制得到2个DNA分子，即①②各一个
B．第二轮复制得到4个DNA分子，即①②③④各一个
C．第四轮复制得到16个DNA分子，其中有4个X基因
D．经五轮循环后产物中有五种不同的DNA分子

减少引物与模板之间的非特异性配对，人们对普通PCR技术进行改良，发明了巢式PCR，原理是利用两套引物进行两轮PCR扩增。首先利用第一对引物（外引物）对目的基因所在的DNA进行第一轮扩增，第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板，利用第二对引物（内引物或巢式引物）结合在第一轮扩增产物内部，经过15～30次循环，获得第二轮扩增片段（即目的基因），最终第二轮扩增片段短于第一轮，基本过程如图所示。下列叙述错误的是

A．两对引物的碱基序列不相同，但均应为单链DNA片段

CRISPR/Cas9 是一种高效的基因编辑技术，𝐶𝑎𝑠9基因表达的Cas9 蛋白像一把“分子剪刀”，在单链向导RNA(SgRNA) 引导下，切割DNA 双链以敲除目标基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9 基因编辑技术的工作原理如右图所示。据图分析，下列叙述正确的是

A.构建CRISPR/Cas9重组质粒，需要用到的工具酶有限制酶、DNA 连接酶和质粒
B.将重组质粒导入大肠杆菌细胞的方法是农杆菌转化法
C.SgRNA与Cas9蛋白形成复合体，该复合体的Cas9蛋白可识别并与目标DNA 序列特异性结合
D.利用基因编辑技术进行特定基因敲除，可以通过DNA 分子杂交技术进行检测

蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应的DM片段结构示意图，其中14表示A上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述错误的是

亚洲棉的突变型光籽和野生型毛籽是-对相对性状，研究发现，亚洲棉某突变体的光籽表型与8号染色体的~880kb至~903kb区间相关，研究人员根据野生型毛籽棉的该区间设计连续的重叠引物进行PCR，产物扩增结果如图所示，下列说法正确的是