【第 12537 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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稻米的直链淀粉是由蜡质基因（waxy）控制合成的淀粉合成酶（GBSS）催化形成，直链淀粉含量高的米饭质地和适口性不高。将 waxy反义基因片段导入水稻细胞抑制内源基因表达，可降低直链淀粉含量。为防止同时导入的标记基因影响，科研人员构建了2种载体，通过共转化以期获得含有目的基因、不含标记基因和报告基因（gus）的转基因水稻，相关流程如下图。请回答下列问题。

(1)waxy反义基因片段导入水稻细胞后可抑制内源基因表达，原因是____。为构建反义基因与gus的融合基因，在利用PCR技术获取反义基因与 gus过程中，需要在设计的两对引物____端分别添加限制酶____、____的识别序列。
(2)过程③中将农杆菌1、2按照1：9比例充分混匀感染水稻愈伤组织，3天后转入含有___的选择培养基筛选抗性愈伤组织。抗性愈伤组织转入再生培养基经____形成胚状体，继而发育成 T₀代植株。
(3)提取T₀代植株的基因组 DNA，根据反义基因和 gus基因部分序列设计引物进行PCR1检测， 同时根据反义基因和终止子的部分序列设计引物进行 PCR2检测，结果如下图，其中M为标准参照，1为阳性对照，2为阴性对照，3~8号为抗性植株 DNA的 PCR产物。其中2 是根据____的DNA 为模板进行 PCR 的结果，据图可以确定____号植株为共转化失败的水稻。

(4)过程⑤将共转化成功的 T₀代植株进行自交，收获种子，取半粒种子进行 GUS 检测（gus的表达产物能使白色X-Gluc 水解生成蓝色产物）。选择检测结果为____色的种子种植得到T₁代植株。最终还需检测____，才可判断是否改良成功。