【第 12534 题】 【题型】:简答题 【章节】:第2节 基因工程的基本操作程序
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【参考答案】(1)Sal EcoRI 6
(2)F7与R扩增产物不含完整的启动子,荧光蛋白基因不表达。
(3)F4与F5之间 F1-F4与R均有,故在F4的下游,而F5之后没有荧光,故在F5上游,所以在二者之间
基因工程的关键步骤是基因表达载体的构建,人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点,该位点结合BCL11A蛋白后,γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置,科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段,将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测,相关信息如图所示。请回答下列问题:
(1)为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达,需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知,在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是___________,在R末端添加的序列所对应的限制酶是_________。本实验中,从产物扩增到载体构建
完成的整个过程共需要________种酶。
(2)将构建的载体导人除去BCL11A基因的受体细胞,成功转化后,含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白,受体细胞有荧光,含
F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是______________________。
(3)向培养液中添加适量的雌激素,含F1~F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光,而含F5~F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光
若y基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列,据此结果可推测,BCL11A蛋白结合位点位于____________________,理由是___________________________________________。