【单选题】大引物PCR定点突变常用来研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变需进行两轮PCR反应即可获得,过程如图所示。下列叙述不正确的
 
A.第一轮PCR过程中复性所用的温度与第二轮PCR复性的温度不一样
B. PCR扩增的定点诱变产物通常需要连接到载体分子上才能表达出相应的性状,该定点诱变产物需具备启动子、终止子等结构才能进行转录和翻译

C.第二轮PCR所用的引物是第一轮PCR的产物DNA的两条链

D.将某功能蛋白的第17位Cys(UGU)改造成Ser(UCU),属于蛋白质工程

【单选题】减少引物与模板之间的非特异性配对，人们对普通PCR技术进行改良，发明了巢式PCR，原理是利用两套引物进行两轮PCR扩增。首先利用第一对引物（外引物）对目的基因所在的DNA进行第一轮扩增，第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板，利用第二对引物（内引物或巢式引物）结合在第一轮扩增产物内部，经过15～30次循环，获得第二轮扩增片段（即目的基因），最终第二轮扩增片段短于第一轮，基本过程如图所示。下列叙述错误的是

A．两对引物的碱基序列不相同，但均应为单链DNA片段

B．使用外引物至少经过3次循环，才能得到图示的第一轮扩增产物
C．若第一轮扩增产生错误片段，则其进入第二轮扩增的概率极低
D．普通PCR与巢式PCR相比，特异性更强，错误率更高

【多选题】热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除𝑇𝑎𝑞DNA聚合酶以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有
A. 𝑇𝑎𝑞酶最适催化温度范围为50∼60℃ 
B.与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物
C.两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸
D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了𝑇𝑎𝑞酶的特异性

【单选题】某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是 

A.增加模板DNA的量

B.延长热变性的时间

C.延长延伸的时间

D.提高复性的温度

【简答题】番木瓜很容易感染番木瓜环斑病毒（英文缩写为PRSV），该病毒是生产番木瓜的限制因素。我国科研人员利用农杆菌转化法，将番木瓜环斑病毒株系Ys的复制酶基因转入番木瓜，成功培育出转基因番木瓜“华农一号”。其大致流程如图所示。回答下列问题：
 
（1） 过程①称为________；选用Ti质粒作为载体，是因为____________。为让Ys的复制酶基因定向插入Ti质粒上，需在Ys的复制酶基因两端分别添加限制酶____________的酶切位点。
（2） 过程③将重组质粒转入农杆菌之前，需先用____________ 处理农杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态；为筛选出含重组质粒的农杆菌，应将转化的农杆菌培养在含卡那霉素的培养基上。过程⑤运用的生物技术利用的生物学原理是__________________。
（3） 若要从个体生物学水平鉴定培育的转基因番木瓜植株是否具有抗番木瓜环斑病毒的特性，应进行的操作是__________________。
（4） 番木瓜是直接供人们食用的转基因水果，一直以来也是转基因安全性争议的焦点之一。对于转基因食品的安全性，公众主要担心的是__________________。