【第 12325 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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胆汁盐水解酶(BSH)对治疗小鼠糖尿病有明显的效果。天然大肠杆菌对外来DNA的入侵具有一定的抵抗力。科研人员从实验小鼠的粪便样本中提取出一种遗传上易驯化（对DNA入侵抵抗力弱）的大肠杆菌菌株M，构建BSH基因的表达载体（如下图）并导入菌株M体内，再将菌株M重新导入小鼠肠道。一段时间后，在小鼠的肠道中出现了能持续分泌BSH的大肠杆菌，小鼠糖尿病症状得到缓解。下列叙述错误的是
 
A. 天然大肠杆菌对外来DNA的入侵具有一定抵抗力，可能与细胞内的限制酶有关
B. 构建基因表达载体时，应该选用限制酶B和限制酶C切割质粒和目的基因
C. 转化前常用Ca²⁺处理大肠杆菌，使其处于能吸收外源DNA分子的状态
D. 将转基因菌株M导入小鼠肠道后，BSH基因在其肠道细胞中稳定复制并表达

 【第 12324 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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CRISPR/Cas9是一种由RNA指导的，利用Cas9核酸酶对靶向基因进行编辑的技术。CRISPR本质是基因组DNA上的一段特殊序列，它广泛存在于原核生物基因组中，是细菌和古细菌为应对病毒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制，而Cas9则是CRISPR相关核酸酶。该技术原理是一条单链向导RNA引导核酸酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。具体过程是通过设计“向导”RNA中20个碱基的识别序列，实现对目标DNA上某个特定位置的切割或特定DNA片段的添加，如下图所示。下列相关叙述正确的是
 
A. Cas9相当于基因工程中的限制酶，具有识别特定脱氧核苷酸序列并使每一条链中特定部位断开的功能
B. 若用Cas9切开后添加特定的DNA片段，需要DNA聚合酶和DNA连接酶
C. “向导”RNA可在解旋酶和RNA聚合酶的催化下合成
D. Cas9能通过专一性破坏双链DNA分子中的磷酸二酯键来切割DNA分子

 【第 12323 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板进行PCR，扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T-DNA插入的具体位置。下列说法错误的是
 

 【第 12322 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
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某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，获得此质粒的农杆菌表现出对两种抗生素的抗性。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示。请据图分析，下列叙述错误的是
 
A. 在构建重组质粒时，选用HindⅢ和SalⅠ两种酶切割目的基因的两端及质粒可防止目的基因和质粒的自我环化
B. 用分别含有氨苄青霉素和四环素的培养基筛选农杆菌时，发现含有目的基因的农杆菌不能在含四环素的培养基上生长，说明抗四环素基因未起到标记基因的作用
C. 采用农杆菌转化法是因为农杆菌感染烟草细胞时，其内的重组Ti质粒上的T-DNA能将目的基因插入烟草细胞的染色体DNA上
D. 利用植物组织培养技术培育转基因抗盐烟草植株，依据的原理是高度分化的植物细胞具有发育成完整植株的能力

 【第 12206 题】 【题型】：单选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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采用CRISPR/Cas9基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定点插入到受精卵的Y染色体上，获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配，通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是
A．基因编辑处理的受精卵在体外培养时，不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液
B．基因编辑处理的受精卵经体外培养至2细胞期，须将其植入同期发情小鼠的子官，才可获得表达EGFP的小鼠
C．分离能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核移植等技术可获得大量的转基因小鼠
D．通过观察早期胚胎的荧光，能表达EGFP的即为雄性小鼠胚胎

 【第 12205 题】 【题型】：单选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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利用基因工程技术生产人胰岛素时，构建重组质粒的过程如图所示，该方法获得的胰岛素分子因容易发生聚合而影响效果。下列说法正确的是
 
A．为避免目的基因任意连接和载体自身环化，应选用Sma Ⅰ、Pst Ⅰ两种酶对它们进行处理
B．基因表达载体除目的基因、标记基因外，还必须有起始密码子和终止密码子等
C．利用乳腺生物反应器生产人胰岛素时，应选用哺乳动物的乳腺细胞为受体细胞
D．可利用蛋白质工程技术直接对胰岛素分子进行改造，使其功能更符合人类的要求

 【第 12204 题】 【题型】：单选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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下图1表示限制酶Spe Ⅰ、Xba Ⅰ识别序列和切割位点，图2表示基因P(960 bp)、基因Q(840 bp)的限制酶Spe Ⅰ或Xba Ⅰ的酶切图谱和融合基因，图3表示几种基因经限制酶Spe Ⅰ或Xba Ⅰ处理后进行电泳(电泳条带表示特定长度的DNA片段)得到的带谱图。下列相关分析错误的是
 　　　　 
A．基因P经限制酶Spe Ⅰ处理后进行电泳的结果与图3中的Ⅰ相同
B．基因Q经限制酶Xba Ⅰ处理后进行电泳的结果与图3中的Ⅱ相同
C．融合基因经限制酶Spe Ⅰ处理后进行电泳的结果与图3中的Ⅲ相同
D．融合基因经限制酶Xba Ⅰ处理后进行电泳的结果与图3中的Ⅳ相同

 【第 12203 题】 【题型】：单选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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MAb技术是一种通过DNA编码产生单克隆抗体的技术，比传统的单克隆抗体制备方法有更多的发展潜力。此前发表的研究显示，以埃博拉病毒为目标且高度优化的基于DNA的单克隆抗体，单次给药在小鼠血液中产生了高水平的抗体表现。下图是dMAb技术在埃博拉病毒感染疾病的临床研究中的操作流程。下列相关叙述错误的是
 
A．dMAb技术涉及蛋白质工程，需要通过抗体结构1和结构2的氨基酸序列人工合成目的基因1和2
B．过程②是基因工程的核心步骤
C．与传统利用杂交瘤细胞产生单克隆抗体的技术相比，dMAb技术在抗体的制备上的优势有产生抗体的细胞种类不局限于免疫细胞(浆细胞)等
D．重组质粒的构建所需的工具只有限制酶和DNA连接酶

 【第 12202 题】 【题型】：多选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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D基因中含两种限制酶BamHⅠ和Msp Ⅰ (5′C↓CGG3′)的酶切位点，Hpa Ⅱ和Msp Ⅰ酶切位点相同，酶切位点处的胞嘧啶可能被甲基化，Hpa Ⅱ对胞嘧啶甲基化敏感(即不能切割甲基化的酶切位点)，而Msp Ⅰ对胞嘧啶甲基化不敏感。某种基因型小鼠(Dd)有表型1和表型2两种表型，利用两种表型的小鼠D基因做了三组酶切实验：第一组单独使用BamHⅠ，第二组使用BamHⅠ＋Msp Ⅰ，第三组使用BamHⅠ＋Hpa Ⅱ；每组完全酶切产物(每一个酶切位点均被切割)通过电泳分离并使用探针得到杂交带，结果如图所示。下列叙述正确的是
 
A．该种小鼠(Dd)有两种表型可能与D基因甲基化程度不同影响了基因的表达有关
B．若经过第一组处理后均可得到8.9kb的基因片段(包含探针)，则说明经过第一组处理后的D基因的酶切位点均没有被甲基化
C．若控制表型1的D基因经过第二组和第三组处理后的酶切结果分别是3.5 kb和8.9 kb，则说明控制表型1的D基因中的4个Msp Ⅰ酶切位点均被甲基化
D．若控制表型2的D基因经过第三组处理后的酶切结果介于3.5kb和8.9kb之间，则说明D基因中最多有3个Hpa Ⅱ酶切位点被甲基化

 【第 12201 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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COR基因是植物的冷调节基因，其编码的亲水性多肽能保护细胞免受冻害，具有提高抗寒性的作用。转录因子CBF(由CBF基因控制合成)能够特异性结合下游的靶基因启动子区，激活COR基因的表达。将不同植物的COR基因和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，转入植物体内能大幅提高植物的抗寒性。在构建基因表达载体时，需要根据载体和目的基因上的限制酶切割位点选择不同的限制酶。当遇到平末端和黏性末端无法连接时，可利用Klenow酶特有的与DNA聚合酶作用相同的特性，将黏性末端补平后再与平末端连接。
(1)研究小组获取了一段包含CBF基因的长DNA片段，根据已知CBF基因序列设计了适宜长度的引物A和引物B，在PCR过程中，经过四次循环消耗引物A和引物B共________________个，引物的作用是________________________________________________________________。
(2)现有若干种限制酶，它们的识别序列和切割位点如图所示。为将COR基因表达载体和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，应选用Hed Ⅰ切割COR基因表达载体、用________________切割CBF基因的某一侧后再连接。为实现CBF基因与COR基因表达载体的另一侧连接，共需用到________________种酶。
 
(3)在转入超量表达载体的转基因植物中，转录因子CBF特异性识别下游的靶基因启动子区后，与______酶结合形成复合体，从而激活COR基因的表达。检测COR基因及其表达过程，可以采用的方法有____________________________________________________________________(至少写出两种)。
(4)科学家在培育的转基因植物中，筛选到一棵AtNUP160植株(atnup160基因的突变体)，AtNUP160基因表达产物能通过干扰核孔复合体的形成，影响RNA的出核转运，进而影响植物的抗寒性。研究发现，AtNUP160植株中CBF基因表达水平降低，影响了COR基因的表达，导致抗寒性减弱。由此推断AtNUP160植株抗寒性减弱的机理是______________________________。