【第 12206 题】 【题型】：单选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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采用CRISPR/Cas9基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定点插入到受精卵的Y染色体上，获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配，通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是
A．基因编辑处理的受精卵在体外培养时，不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液
B．基因编辑处理的受精卵经体外培养至2细胞期，须将其植入同期发情小鼠的子官，才可获得表达EGFP的小鼠
C．分离能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核移植等技术可获得大量的转基因小鼠
D．通过观察早期胚胎的荧光，能表达EGFP的即为雄性小鼠胚胎

 【第 12205 题】 【题型】：单选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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利用基因工程技术生产人胰岛素时，构建重组质粒的过程如图所示，该方法获得的胰岛素分子因容易发生聚合而影响效果。下列说法正确的是
 
A．为避免目的基因任意连接和载体自身环化，应选用Sma Ⅰ、Pst Ⅰ两种酶对它们进行处理
B．基因表达载体除目的基因、标记基因外，还必须有起始密码子和终止密码子等
C．利用乳腺生物反应器生产人胰岛素时，应选用哺乳动物的乳腺细胞为受体细胞
D．可利用蛋白质工程技术直接对胰岛素分子进行改造，使其功能更符合人类的要求

 【第 12204 题】 【题型】：单选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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下图1表示限制酶Spe Ⅰ、Xba Ⅰ识别序列和切割位点，图2表示基因P(960 bp)、基因Q(840 bp)的限制酶Spe Ⅰ或Xba Ⅰ的酶切图谱和融合基因，图3表示几种基因经限制酶Spe Ⅰ或Xba Ⅰ处理后进行电泳(电泳条带表示特定长度的DNA片段)得到的带谱图。下列相关分析错误的是
 　　　　 
A．基因P经限制酶Spe Ⅰ处理后进行电泳的结果与图3中的Ⅰ相同
B．基因Q经限制酶Xba Ⅰ处理后进行电泳的结果与图3中的Ⅱ相同
C．融合基因经限制酶Spe Ⅰ处理后进行电泳的结果与图3中的Ⅲ相同
D．融合基因经限制酶Xba Ⅰ处理后进行电泳的结果与图3中的Ⅳ相同

 【第 12203 题】 【题型】：单选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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MAb技术是一种通过DNA编码产生单克隆抗体的技术，比传统的单克隆抗体制备方法有更多的发展潜力。此前发表的研究显示，以埃博拉病毒为目标且高度优化的基于DNA的单克隆抗体，单次给药在小鼠血液中产生了高水平的抗体表现。下图是dMAb技术在埃博拉病毒感染疾病的临床研究中的操作流程。下列相关叙述错误的是
 
A．dMAb技术涉及蛋白质工程，需要通过抗体结构1和结构2的氨基酸序列人工合成目的基因1和2
B．过程②是基因工程的核心步骤
C．与传统利用杂交瘤细胞产生单克隆抗体的技术相比，dMAb技术在抗体的制备上的优势有产生抗体的细胞种类不局限于免疫细胞(浆细胞)等
D．重组质粒的构建所需的工具只有限制酶和DNA连接酶

 【第 12202 题】 【题型】：多选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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D基因中含两种限制酶BamHⅠ和Msp Ⅰ (5′C↓CGG3′)的酶切位点，Hpa Ⅱ和Msp Ⅰ酶切位点相同，酶切位点处的胞嘧啶可能被甲基化，Hpa Ⅱ对胞嘧啶甲基化敏感(即不能切割甲基化的酶切位点)，而Msp Ⅰ对胞嘧啶甲基化不敏感。某种基因型小鼠(Dd)有表型1和表型2两种表型，利用两种表型的小鼠D基因做了三组酶切实验：第一组单独使用BamHⅠ，第二组使用BamHⅠ＋Msp Ⅰ，第三组使用BamHⅠ＋Hpa Ⅱ；每组完全酶切产物(每一个酶切位点均被切割)通过电泳分离并使用探针得到杂交带，结果如图所示。下列叙述正确的是
 
A．该种小鼠(Dd)有两种表型可能与D基因甲基化程度不同影响了基因的表达有关
B．若经过第一组处理后均可得到8.9kb的基因片段(包含探针)，则说明经过第一组处理后的D基因的酶切位点均没有被甲基化
C．若控制表型1的D基因经过第二组和第三组处理后的酶切结果分别是3.5 kb和8.9 kb，则说明控制表型1的D基因中的4个Msp Ⅰ酶切位点均被甲基化
D．若控制表型2的D基因经过第三组处理后的酶切结果介于3.5kb和8.9kb之间，则说明D基因中最多有3个Hpa Ⅱ酶切位点被甲基化

 【第 12201 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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COR基因是植物的冷调节基因，其编码的亲水性多肽能保护细胞免受冻害，具有提高抗寒性的作用。转录因子CBF(由CBF基因控制合成)能够特异性结合下游的靶基因启动子区，激活COR基因的表达。将不同植物的COR基因和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，转入植物体内能大幅提高植物的抗寒性。在构建基因表达载体时，需要根据载体和目的基因上的限制酶切割位点选择不同的限制酶。当遇到平末端和黏性末端无法连接时，可利用Klenow酶特有的与DNA聚合酶作用相同的特性，将黏性末端补平后再与平末端连接。
(1)研究小组获取了一段包含CBF基因的长DNA片段，根据已知CBF基因序列设计了适宜长度的引物A和引物B，在PCR过程中，经过四次循环消耗引物A和引物B共________________个，引物的作用是________________________________________________________________。
(2)现有若干种限制酶，它们的识别序列和切割位点如图所示。为将COR基因表达载体和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，应选用Hed Ⅰ切割COR基因表达载体、用________________切割CBF基因的某一侧后再连接。为实现CBF基因与COR基因表达载体的另一侧连接，共需用到________________种酶。
 
(3)在转入超量表达载体的转基因植物中，转录因子CBF特异性识别下游的靶基因启动子区后，与______酶结合形成复合体，从而激活COR基因的表达。检测COR基因及其表达过程，可以采用的方法有____________________________________________________________________(至少写出两种)。
(4)科学家在培育的转基因植物中，筛选到一棵AtNUP160植株(atnup160基因的突变体)，AtNUP160基因表达产物能通过干扰核孔复合体的形成，影响RNA的出核转运，进而影响植物的抗寒性。研究发现，AtNUP160植株中CBF基因表达水平降低，影响了COR基因的表达，导致抗寒性减弱。由此推断AtNUP160植株抗寒性减弱的机理是______________________________。

 【第 12200 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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钙依赖蛋白激酶(CDPK)在植物的信号传导和提高植物抗性方面发挥着重要作用。科学家通过将CDPK基因导入拟南芥(双子叶植物)中，来获得具有抗性的新品种。如图为某种质粒表达载体和含CDPK基因的DNA片段示意图，图中标记了限制酶的切割位点。据此回答下列问题：
 
(1)通过基因工程，将CDPK基因导入拟南芥中，获得具有抗性的新品种的育种原理是____________________。为了使CDPK基因插入质粒中，应选取____________________(两种限制性内切核酸酶)分别切割质粒和含目的基因的DNA片段。
(2)利用PCR可获得大量的CDPK基因，PCR扩增的第一步：用微量移液器在微量离心管中加入缓冲液、4种脱氧核苷酸的等量混合液、水、还需要加入________________________。PCR的产物一般通过琼脂凝胶电泳来鉴定，在凝胶中的DNA分子的迁移速率与_______________有关。
(3)将CDPK基因导入拟南芥细胞通常采用的方法是_________________________________。
(4)检测CDPK基因是否成功表达的方法是______________________，若有杂交带出现，表明已产生了CDPK。

 【第 12023 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。

 

(1)构建含除草剂抗性基因的表达载体，传统的方法是目的基因通过限制酶和____________酶与载体进行重组。载体上目的基因插入位点的限制酶识别序列________(填“能”或“不能”)出现在目的基因内部，可通过________技术在目的基因两侧添加相应限制酶识别序列，以便构建表达载体。
(2)为了减少限制酶识别序列的影响，科研人员研发了新的DNA重组方法：无缝克隆技术(图2)，其中In­Fusion酶可以将任何具有相同15 bp末端序列的线性DNA分子进行连接，类似同源重组。

 

①科研人员希望应用以上方法构建含有A和GUS基因的重组DNA分子，首先获得了3种DNA分子如图3，然后混合进行In­Fusion反应。

 

 

如果引物2上额外添加的片段对应GUS基因中加粗的e片段，那么引物1和引物4上额外增加的片段分别对应载体中的片段________。完成重组反应后，将重组表达载体加入经过________处理的农杆菌中。
②为筛选成功转入重组DNA分子的菌落，可以选取引物________扩增目的基因并电泳检测。请在图4中画出阳性菌落的电泳结果。
(3)农杆菌转化愈伤组织时，用含________的选择培养基筛选转化的愈伤组织。转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织(假阳性)也可能在选择培养基上生长。已知报告基因GUS表达产物能催化无色物质K呈现蓝色，则排除假阳性的原理是：报告基因GUS在________细胞中表达，而在农杆菌中不表达，因此用无色物质K处理上述能正常生长的愈伤组织，假阳性的农杆菌________(填“出现”或“不出现”)蓝色。

 【第 12015 题】 【题型】：单选题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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以菜花为材料提取DNA时，需将材料进行研磨，研磨液的成分常含有SDS(蛋白质变性剂)、EDTA(DNA酶抑制剂，稳定DNA活性)、Tris(缓冲剂)。下列有关叙述错误的是
A．若选择鸡血细胞为材料，则省去了研磨过程
B．SDS可以使蛋白质变性，便于DNA与蛋白质分离
C．EDTA可以防止DNA水解成核糖核苷酸
D．Tris可以调节溶液中的pH

 【第 11367 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用  
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铝在土壤中常以铝酸盐的形式存在，可造成土壤酸化而影响植物生长。铝能抑制植物根尖细胞的分裂，抑制根生长，破坏根组织。部分植物能通过根部细胞膜上的苹果酸通道蛋白（ALMT）将苹果酸转运到细胞外来缓解铝毒。可将 ALMT 基因导入植物细胞，来培育转基因耐铝植物，请回答下列问题：
（1）可以从基因文库中获得 ALMT 基因，在合成 cDNA 的过程中，反应体系内加入的物质除 mRNA 和 ATP 外，还包括__________________、____________________________________。
（2）可将 ALMT 基因插入农杆菌 Ti 质粒的__________________片段中，以便目的基因进入植物细胞。利用该方法导入的目的基因的遗传一般遵循孟德尔遗传定律，原因是____________________________________。
（3）启动子是__________________特异性识别并结合的位点，能调控目的基因的表达。ALMT基因的启动子有两种类型，其中 α 启动子能使 ALMT 基因在酸性土壤的诱导下表达，β 启动子能使 ALMT 基因高效表达而无需酸性诱导。则在获得转 ALMT 基因耐铝植物时应使用___________启动子，不使用另外一种启动子的原因是______________________。