题型：单选题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
11
某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，获得此质粒的农杆菌表现出对两种抗生素的抗性。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示。请据图分析，下列叙述错误的是
A. 在构建重组质粒时，选用HindⅢ和SalⅠ两种酶切割目的基因的两端及质粒可防止目的基因和质粒的自我环化
B. 用分别含有氨苄青霉素和四环素的培养基筛选农杆菌时，发现含有目的基因的农杆菌不能在含四环素的培养基上生长，说明抗四环素基因未起到标记基因的作用
C. 采用农杆菌转化法是因为农杆菌感染烟草细胞时，其内的重组Ti质粒上的T-DNA能将目的基因插入烟草细胞的染色体DNA上
D. 利用植物组织培养技术培育转基因抗盐烟草植株，依据的原理是高度分化的植物细胞具有发育成完整植株的能力
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某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，获得此质粒的农杆菌表现出对两种抗生素的抗性。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示。请据图分析，下列叙述错误的是
题型：多选题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
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如图为DNaseI (一种消化DNA的内切核酸酶)足迹法示意图，该方法可鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上的结合位点，下列有关叙述正确的是
A．DNaseI作用于DNA的氢键和磷酸二酯键
B．加入的蛋白质可保护相应DNA序列不受DNaseI攻击
C．图中①处的空白区域是蛋白质与DNA结合后留下的“足迹”
D．该方法可找到与特异性DNA结合的目标蛋白且能确定目标蛋白结合的碱基
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如图为DNaseI (一种消化DNA的内切核酸酶)足迹法示意图，该方法可鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上的结合位点，下列有关叙述正确的是
题型：多选题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
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下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。下列说法正确的是
A．在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌
B．在含氨苄青霉素的培养基上，能生长的是导入了重组质粒的细菌
C．在含氨苄青霉素的培养基上能生长，但在含四环素的培育基不能生长的细菌是导入了重组质粒的细菌
D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长
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下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。下列说法正确的是
题型：单选题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
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限制酶BamHI和BglⅡ是两种常见的工具酶，它们的识别序列及切割位点依次为G↓GATCC和A↓GATCT。研究中用BamHI切割DNA获得目的基因，用BglⅡ切割质粒，并连接得到重组质粒，下列相关叙述错误的是
A.酶切过程中，需控制好酶浓度、温度和反应时间等因素
B.目的基因经限制酶BamHI切割后形成的黏性末端是-CTAG-
C.分别用两种限制酶切割，保证了目的基因定向插入质粒
D.经两种酶处理得到的重组质粒不能再被这两种酶所识别
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限制酶BamHI和BglⅡ是两种常见的工具酶，它们的识别序列及切割位点依次为G↓GATCC和A↓GATCT。研究中用BamHI切割DNA获得目的基因，用BglⅡ切割质粒，并连接得到重组质粒，下列相关叙述错误的是
B.目的基因经限制酶BamHI切割后形成的黏性末端是-CTAG-
C.分别用两种限制酶切割，保证了目的基因定向插入质粒
D.经两种酶处理得到的重组质粒不能再被这两种酶所识别
题型：多选题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
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检测发现，转入大肠杆菌的蛋白M基因表达效率很低,研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好,因而设计了与蛋白 M 基因结合的两对引物（引物B和引物C中都替换了一个碱基），并按图示方式依次进行了4次PCR，以得到定点突变的新的蛋白M基因。这4次PCR应该选择的引物，正确的是
A.PCR1--引物A和引物B
B.PCR2--引物C和引物 D
C.PCR3--引物B和引物C
D.PCR4--引物A和引物 D
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检测发现，转入大肠杆菌的蛋白M基因表达效率很低,研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好,因而设计了与蛋白 M 基因结合的两对引物（引物B和引物C中都替换了一个碱基），并按图示方式依次进行了4次PCR，以得到定点突变的新的蛋白M基因。这4次PCR应该选择的引物，正确的是
A.PCR1--引物A和引物B
B.PCR2--引物C和引物 D
C.PCR3--引物B和引物C
D.PCR4--引物A和引物 D
题型：简答题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
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二苯乙烯苷是我国传统药材何首乌特有的药效成分，具有抗氧化、清除自由基等功效。合成二苯乙烯苷的关键酶是芪合酶（STS），为获得大量的STS，研究人员利用质粒（如图2）将STS基因（如图1）转化到大肠杆菌细胞内进行表达。回答下列问题：
(1)采用_________技术可以快速、大量获得目的基因，据图1分析，利用该技术扩增STS基因时，应选择的引物是________。
(2)为使STS基因与质粒正确连接，需在所选引物的_______（填“3”或“5’”）端分别增加相应限制酶的酶切位点，同时选用__________两种限制酶切割质粒。
(3)启动子是_______识别和结合的部位。很多启动子具有物种特异性，在图2质粒中插入STS基因，其上游启动子应选择_______（填写字母）。
A．何首乌启动子 B．大肠杆菌启动子 C．农杆菌启动子
(4)可将转化后的大肠杆菌接种到含________的培养基上进行筛选。能在该培养基上生长的大肠杆菌是否一定含有STS基因?请判断并说明理由：________。
(5)科研人员利用相关技术替换了STS某个位点的氨基酸，提高了STS的抗氧化能力，该技术属于_________。
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【参考答案】 (1)PCR 引物2 和引物 3(2) 5' XhoI和 NdeI
二苯乙烯苷是我国传统药材何首乌特有的药效成分，具有抗氧化、清除自由基等功效。合成二苯乙烯苷的关键酶是芪合酶（STS），为获得大量的STS，研究人员利用质粒（如图2）将STS基因（如图1）转化到大肠杆菌细胞内进行表达。回答下列问题：
题型：单选题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
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乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量；酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为通过双酶切构建重组质粒的过程。GTG为原核生物偏好的起始密码子编码序列，ATG为真核生物偏好的起始密码子编码序列。下列说法正确的是
A．引物2的3'端序列应包含XbaI的识别序列
B．重组质粒以能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体
C．PCR反应时，缓冲液中一般要添加Ca
2+ 来激活相关酶
D．引物1的5'端序列应考虑将GTG改为ATG
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乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量；酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为通过双酶切构建重组质粒的过程。GTG为原核生物偏好的起始密码子编码序列，ATG为真核生物偏好的起始密码子编码序列。下列说法正确的是2+ 来激活相关酶
题型：单选题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
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脱氧核苷三磷酸（dNTP）和双脱氧核苷三磷酸（ddNTP、ddN—Pα ~Pβ ~Pγ ）结构类似，两者的区别是ddNTP脱氧核糖第3位碳原子上的羟基被氢原子取代。DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。现有一些序列为5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子单链片段，拟通过PCR获得被32P标记且3’端为碱基A的不同长度的子链DNA。在反应管中加入单链模板、引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+ 及缓冲溶液。下列叙述正确的是32 P标记的ddATP32 P标记且3’端为碱基A的子链DNA
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脱氧核苷三磷酸（dNTP）和双脱氧核苷三磷酸（ddNTP、ddN—Pα ~Pβ ~Pγ ）结构类似，两者的区别是ddNTP脱氧核糖第3位碳原子上的羟基被氢原子取代。DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。现有一些序列为5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子单链片段，拟通过PCR获得被32P标记且3’端为碱基A的不同长度的子链DNA。在反应管中加入单链模板、引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+ 及缓冲溶液。下列叙述正确的是32 P标记的ddATP32 P标记且3’端为碱基A的子链DNA
题型：单选题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
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为研究玉米的抗逆机制，科研人员利用图中的双分子荧光互补技术分析玉米M5与B72蛋白的相互作用。下列说法正确的是
A．直接将YFP剪切为N端和C端后，分别与M5和B72蛋白连接
B．设计特异性引物以玉米cDNA为模板扩增M5和B72基因
C．将M5和B72基因融合后连接到质粒上的YFP基因中
D．将含有M5和B72的基因表达载体分别导入不同细胞中
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为研究玉米的抗逆机制，科研人员利用图中的双分子荧光互补技术分析玉米M5与B72蛋白的相互作用。下列说法正确的是
题型：简答题 1 [0] 第2节 基因工程的基本操作.. 【试题】
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光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒上相关限制酶的酶切位点如图甲所示，电泳检测结果如图乙所示。回答下列问题：
(1)操作过程中需要用到的工具有___________，构建表达载体时应选用_____________这两种限制酶处理质粒。
(2)为保证通过mRNA逆转录获得的光敏色素基因A和质粒的充分连接，一般需要在该基因上、下游引物的___________端分别添加酶切位点。一般在这两部位添加不同的酶切位点，主要目的是___________。
(3)A同学认为仅由图乙电泳结果不能确定1、3、4号转基因棉花均培育成功，理由是_________。
(4)在生物学领域，对光敏色素进行分子改造使用的技术是蛋白质工程。获得光敏色素分子的基本途径为：____________→设计预期的光敏色素的分子结构→推测应有的___________→找到相对应的脱氧核苷酸序列。
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【参考答案】 (1)限制性内切核酸酶(限制酶)、DNA连接酶和载体BcI和HindⅢ
(2)5'使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连
(3)由图乙可知1、3、4号均成功导入光敏色素基因A，但转基因棉花是否培育成功还需要进行生物个体水平上的鉴定
(4) 预期的光敏色素的功能 氨基酸序列
光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒上相关限制酶的酶切位点如图甲所示，电泳检测结果如图乙所示。回答下列问题：
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【第 12322 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序 
