【简答题】GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图1所示)，并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
 
(1)在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是____________。
(2)构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的____限制酶进行酶切。
(3)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有3种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图1所示)。为鉴定这3种连接方式，选择HpaⅠ酶和BamHⅠ酶对筛选得到的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第____泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
(4)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的____与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定密度时，需进行____培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。

【答案】：(1)使细胞分散开　(2)XhoⅠ　(3)②　(4)抗体　传代

【解析】：(1)动物细胞间的物质主要成分是蛋白质，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，目的是使组织中的细胞分散成单个细胞。(2)据图1可知，GDNF基因两端和载体上都有XhoⅠ限制酶的酶切位点。(3)据图1可知，用HpaⅠ和BamHⅠ限制酶对三种载体进行酶切，单个载体自连只有HpaⅠ限制酶的酶切位点，得到6000bpDNA的片段；正向连接重组载体有HpaⅠ和BamHⅠ限制酶的酶切位点，得到700bpDNA的片段和6000bpDNA的片段；反向连接重组载体有HpaⅠ和BamHⅠ限制酶的酶切位点，得到200bpDNA的片段和6500bpDNA的片段。(4)检测目的基因是否成功表达，可采用抗原—抗体杂交法。培养的原代细胞贴满瓶壁重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常称为传代培养。传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去，科研上使用的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。