【简答题】

某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Amp^r或Tet^r中会导致相应的基因失活（Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有___________________（答出两点即可）。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。

（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是__________；并且__________和__________的细胞也是不能区分的，其原因是_________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有原因是_________的固体培养基。

（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于_________。

【答案】：

（1）具有一个或多个限制酶酶切位点、具有标记基因、能够在宿主细胞中复制表达等 

（2）两者都不含氨苄青霉素抗性基因，在氨苄青霉素的培养基上都不能生长  含有质粒载体  含有插入了目的基因的重组质粒  两者都含氨苄青霉素抗性基因，在氨苄青霉素的培养基上都能生长  四环素 

（3）大肠杆菌

【解析】：

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有具有一个或多个限制酶酶切位点、具有标记基因、能够在宿主细胞中复制表达等。

（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是两者都不含氨苄青霉素抗性基因，在氨苄青霉素的培养基上都不能生长；并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的，其原因是两者都含氨苄青霉素抗性基因，在氨苄青霉素的培养基上都能生长 。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有四环素的固体培养基。