【单选题】乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量；酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为通过双酶切构建重组质粒的过程。GTG为原核生物偏好的起始密码子编码序列，ATG为真核生物偏好的起始密码子编码序列。下列说法正确的是

A．引物2的3'端序列应包含XbaI的识别序列
B．重组质粒以能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体
C．PCR反应时，缓冲液中一般要添加Ca²⁺来激活相关酶
D．引物1的5'端序列应考虑将GTG改为ATG

 

 

【答案】：D

【解析】：【分析】基因工程技术的基本步骤:
(1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成:
(2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

(3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。(4)目的基因的检测与鉴定。

【详解】A、根据题意可知，含GTG的一端为LDH基因的起始，为保证通过双酶切以正确方向插入质粒，设计引物1的5端序列需要包含

BamHI的识别序列，引物2的5端序列应包含Xbal的识别序列，A错误;B、结合题意可知，质粒上有作为标记基因尿嘧啶合成酶基因，所以本过程中重组质粒以不能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体，然后在缺乏尿嘧啶的选择培养基上，不能合成尿嘧啶的酿酒酵母菌株不能生存，导入重组质粒的酿酒酵母菌株因为获得了尿嘧啶合成酶基因而可以正常生存，从而起到筛选作用，B错误;
C、真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2*激活，因此，PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2*，C错误;D、设计引物1的5端序列，应考虑将编码起始密码子的序列由原核生物偏好的GTG转变为真核生物偏好的ATG，以便目的基因在酵母细胞中更好的表达，D正确。
故选D。