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  • 所属章节:第2节 基因工程的基本操作程序

  • 【单选题】脱氧核苷三磷酸(dNTP)和双脱氧核苷三磷酸(ddNTP、ddN—Pα~Pβ~Pγ)结构类似,两者的区别是ddNTP脱氧核糖第3位碳原子上的羟基被氢原子取代。DNA复制时,ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点,并终止DNA片段的延伸。现有一些序列为5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子单链片段,拟通过PCR获得被32P标记且3’端为碱基A的不同长度的子链DNA。在反应管中加入单链模板、引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+及缓冲溶液。下列叙述正确的是
    A.反应底物是dCTP、dGTP、dTTP和γ位32P标记的ddATP
    B.TaqDNA聚合酶催化磷酸二酯键的形成,并需要Mg2+激活
    C.ddNTP与dNTP竞争脱氧核苷酸链的3’末端和5’末端
    D.实验中可得到4种不同长度被32P标记且3’端为碱基A的子链DNA

    【答案】:B

    【解析】:【分析】1、ATP是腺苷三磷酸的英文名称缩写,其结构可以简写成A-P~P~P,其中A代表腺苷,P代表磷酸基团,~代表一种特殊的化学键由于两个相邻的磷酸基团都带负电荷而相互排斥等原因,使得这种化学键不稳定,未端磷酸基团有一种离开ATP而与其他分子结合

    的趋势,也就是具有较高的转移势能。2、分析题意可知,dNTP和ddNTP具有与ATP(NTP)相似的结构,ATP中的糖是核糖,dNTP中的糖是脱氧核糖,而ddNTP中的糖是双脱氧核糖。进行DNA复制时,dNTP作为原料参与DNA的复制,同时能提供能量,而ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点,导致DNA片段延伸终止,即阻断DNA的复制。题干中要对模板DNA分子单链片段通过PCR进行扩增,且要获得3为碱基A的不同长度的DNA分子,说明需要ddATP作为竞争底物参与PCR过程。

    【详解】

    A、合成DNA的原料为脱氧核苷酸,故反应底物是dCTP、dGTP、TTP、dATP和a位?P标记的ddATP,A错误

    B、TaqDNA聚合酶能够催化脱氧核苷酸在DNA的3”端延伸,故其在PCR中的作用是形成磷酸二酯键,且其需要Mg2+的激活,B正确;

    C、DNA复制时,合成的子链由5”端向3”端延伸,因此ddNTP与dNTP竞争的延长位点是脱氧核苷酸链的3”未端,C错误;

    D、分析题意可知,5’-GCCTAAGATCGTA-3'的DNA分子单链片段共有四个碱基“A”,内部有三个碱基“A”,因此利用PCR反应体系,最多可得到3种被32P标记的子链DNA,D错误。

    故选B。