【多选题】重叠延伸PCR技术是设计含突变点的互补核苷酸片段作为引物，在PCR过程中，互补的核苷酸片段形成重叠，重叠的部分互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得突变基因的方法。科研人员将枯草芽孢杆菌的甘油激酶的第270位氨基酸M突变为1，构建出了对甘油高效利用的枯草芽孢杆菌。下列说法正确的是

A．通过PCR1获得产物AB需要进行2轮PCR扩增
B．无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD
C．在同一反应体系中加入四种引物可以同时获得大量产物AB和CD
D．获取目的基因后，构建质粒载体，形成基因表达载体。基因表达载体上保证其能在宿主细胞中扩增的结构是复制原点，保证目的基因能正常转录的结构是启动子和终止子

 

 

【答案】：B, D

【解析】：A、通过PCR1获得产物AB需要进行3轮PCR扩增，A错误;B、AB下链的延伸方向向左，CD上链的延伸方向向右，所以无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD，B正确;
C、需要分别在不同的反应体系中通过PCR获得AB和CD，C错误;获取目的基因后，下一步就是要让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代;同时，使目的基因能够表达和发挥作D用，这就需要构建基因表达载体。基因表达载体需要有复制原点、启动子、终止子、标记基因和目的基因，其中复制原点能保证目的基因在宿主细胞种复制，启动子和终止子保证了目的基因在受体细胞中正常转录。D正确。故选BD。