【简答题】为增加油菜种子的含油量，科研人员将转运肽基因与酶D基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

(1)研究人员采用PCR技术获取酶D基因和转运肽基因，该技术是利用____的原理，使相应基因呈指数增加。所含三种限制酶(XbaⅠ、ClaⅠ、SacⅠ)的切点如图所示，则用____和____酶处理两个基因后，可得到两基因相连的融合基因。
(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是________________；进一步筛选后获得转基因油菜细胞，依据________原理，可将其培育成转基因油菜植株。
(4)用____法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

 

 

【答案】：(1)DNA双链复制　ClaⅠ　 DNA连接
(2)T－DNA　将获得的农杆菌接种在含四环素的固体培养基上培养
(3)利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞植物细胞具有全能性
(4)抗原—抗体杂交

【解析】：

(1)PCR技术的原理是DNA复制。提取转运肽基因需要XbaⅠ和ClaⅠ，提取酶D基因需要ClaⅠ和SacⅠ，其中由ClaⅠ切割形成的基因末端是相同的，故用ClaⅠ和DNA连接酶处理两个基因后，可得到两基因相连的融合基因。

(2)利用农杆菌转化法导入目的基因，需要将目的基因插入农杆菌中的Ti质粒的T－DNA中，所以需要将上述的融合基因插入Ti质粒的T－DNA中。重组Ti质粒上面有四环素抗性基因，所以筛选含有融合基因的单菌落时需要将获得的农杆菌接种在含四环素的固体培养基上培养。

(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞。进一步筛选后获得转基因油菜细胞，采用植物组织培养技术可将其培育成转基因油菜植株，该过程依据的原理是植物细胞具有全能性。

(4)基因表达的产物是蛋白质，故采用抗原—抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。