第2节 基因工程的基本操作程序专项练习

限制酶BamHI和BglⅡ是两种常见的工具酶，它们的识别序列及切割位点依次为G↓GATCC和A↓GATCT。研究中用BamHI切割DNA获得目的基因，用BglⅡ切割质粒，并连接得到重组质粒，下列相关叙述错误的是
A.酶切过程中，需控制好酶浓度、温度和反应时间等因素

B.目的基因经限制酶BamHI切割后形成的黏性末端是-CTAG-

C.分别用两种限制酶切割，保证了目的基因定向插入质粒

某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是 

A.增加模板DNA的量

B.延长热变性的时间

C.延长延伸的时间

D.提高复性的温度

临床上可采用PCR和DNA反向点杂交相结合的检测技术对HPV基因进行分型,过程如下:设计出针对已知有致癌风险的23种HPV基因的特异性引物并标记上会发生显色反应的生物素,通过 PCR对待测样本 DNA进行扩增,再将扩增产物直接与固定在膜上的分型基因探针(包括17种高危型和6种低危型)进行杂交。经显色处理后,与固定化探针结合的HPV基因就会在相应位置产生显色反应,从而判断待测样本是否被含有这些HPV基因的病毒感染。有关说法错误的是
A.生物素应标记在引物的5'端
B.该检测技术需要对扩增的DNA样本进行琼脂糖凝胶电泳
C.该检测技术具有高度的特异性,能够准确地区分不同类型的HPV病毒
D.反向点杂交是通过分型基因探针与扩增的目的片段碱基互补配对结合在起的

重叠延伸PCR可实现定点基因诱变，其操作过程如图所示(凸起处代表突变位点)。下列说法正确的是
 
A．过程①需要把两对引物同时加入一个扩增体系以提高扩增效率
B．过程①需要2轮PCR才能得到图中所示PCR产物
C．过程②的产物都可以完成延伸过程
D．若过程④得到16个突变基因则需要消耗15个通用引物RP2

“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。下列叙述错误的是
 
A．第一轮复制得到2个DNA分子，即①②各一个
B．第二轮复制得到4个DNA分子，即①②③④各一个
C．第四轮复制得到16个DNA分子，其中有4个X基因
D．经五轮循环后产物中有五种不同的DNA分子

减少引物与模板之间的非特异性配对，人们对普通PCR技术进行改良，发明了巢式PCR，原理是利用两套引物进行两轮PCR扩增。首先利用第一对引物（外引物）对目的基因所在的DNA进行第一轮扩增，第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板，利用第二对引物（内引物或巢式引物）结合在第一轮扩增产物内部，经过15～30次循环，获得第二轮扩增片段（即目的基因），最终第二轮扩增片段短于第一轮，基本过程如图所示。下列叙述错误的是

A．两对引物的碱基序列不相同，但均应为单链DNA片段

CRISPR/Cas9 是一种高效的基因编辑技术，𝐶𝑎𝑠9基因表达的Cas9 蛋白像一把“分子剪刀”，在单链向导RNA(SgRNA) 引导下，切割DNA 双链以敲除目标基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9 基因编辑技术的工作原理如右图所示。据图分析，下列叙述正确的是

A.构建CRISPR/Cas9重组质粒，需要用到的工具酶有限制酶、DNA 连接酶和质粒
B.将重组质粒导入大肠杆菌细胞的方法是农杆菌转化法
C.SgRNA与Cas9蛋白形成复合体，该复合体的Cas9蛋白可识别并与目标DNA 序列特异性结合
D.利用基因编辑技术进行特定基因敲除，可以通过DNA 分子杂交技术进行检测

为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白HMA3基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的𝐻𝑀𝐴3基因，同时避免内源𝐻𝑀𝐴3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是
 
A.①+③             B.①+②         C.③+②          D.③+④

热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除𝑇𝑎𝑞DNA聚合酶以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有
A. 𝑇𝑎𝑞酶最适催化温度范围为50∼60℃ 
B.与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物
C.两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸
D.PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了𝑇𝑎𝑞酶的特异性

重叠延伸PCR技术是设计含突变点的互补核苷酸片段作为引物，在PCR过程中，互补的核苷酸片段形成重叠，重叠的部分互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得突变基因的方法。科研人员将枯草芽孢杆菌的甘油激酶的第270位氨基酸M突变为1，构建出了对甘油高效利用的枯草芽孢杆菌。下列说法正确的是