将天然Ti质粒改造成含有Vir基因的辅助质粒（作用为辅助T-DNA转移）和不含有Vir基因、含有T-DNA的穿梭质粒，共同转入农杆菌，可提高转化效率。细菌和棉花对密码子偏好不同，为提高翻译效率，增强棉花抗病虫害能力，进行下图所示操作。
注：F1～F3，R1～R3表示引物；T-DNA-LB表示T-DNA左边界；T-DNA-RB表示T-DNA右边界；Ori表示复制原点；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。
请分析并回答下列问题：
(1)本操作中获取目的基因的方法有______________________。
(2)根据图中穿梭质粒上的KanR和HygBR两个标记基因的位置，用___________（选填“卡那霉素”或“潮霉素B”）初步筛选转化的棉花愈伤组织。
(3)为检测棉花植株是否导入目的基因，提取棉花植株染色体DNA作模板，进行PCR，应选用的引物是___________。
(4)穿梭质粒中通过使用两个p35s启动子，可以增加______________________的结合位点，从而提高目的基因的转录效率，合成更多的mRNA，进而增加蛋白质的表达量。
(5)对T-DNA边界序列进行测序发现，在连接的T-DNA部分中，RB通常比LB更精确完整。RB连接序列更完整是因为与RB共价连接的VirD2蛋白可以保护它免受核酸外切酶消化。而较大的LB序列缺失是因为LB末端区域缺乏保护。为了直观地显示T-DNA的转移是否完整，可用绿色荧光蛋白基因（GFP）作为报告基因，构建在紧邻    ___________（选填“左”或“右”）边界的位置。
(6)本研究采用的部分生物技术属于蛋白质工程，理由是______。
A．通过含有双质粒的农杆菌转化棉花细胞
B．将苏云金杆菌Bt基因导入棉花细胞中表达
C．将1～1362基因序列改变为棉花细胞偏好密码子的基因序列
D．用1～1362合成基因序列和1363～1848天然基因序列获得改造的抗虫蛋白

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