人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。下列有关叙述错误的是：

A.为将扩增后的产物定向插入载体,指导荧光蛋白基因表达，需用MunI和XhoI处理载体
B.从产物扩增到载体构建完成的整个过程需构建7种载体
C.将构建的载体导人去除BCLIIA基因的受体细胞,可能出现含F1与R扩增产物的受体细胞无荧光，而含F2－F7与R扩增产物的受体细胞有荧光
D.向培养液中添加适量的雌激素，可导致部分受体细胞不再有荧光

基因工程的关键步骤是基因表达载体的构建，人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。请回答下列问题：

(1)为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达,需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知,在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是________，在R末端添加的序列所对应的限制酶是______。本实验中,从产物扩增到载体构建
完成的整个过程共需要_____种酶。

(2)将构建的载体导人除去BCL11A基因的受体细胞,成功转化后,含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白,受体细胞有荧光,含
F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是________________。
(3)向培养液中添加适量的雌激素,含F1~F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，而含F5~F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光
若y基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列，据此结果可推测,BCL11A蛋白结合位点位于______________,理由是____________________________。

基因工程的关键步骤是基因表达载体的构建，人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。请回答下列问题：

(1)基因表达载体包括复制原点、目的基因、             （答出3点）。据图可知，扩增的γ基因上游不同长度的片段中，扩增出最长的片段需要选用的引物组合为             。

(2)由于荧光蛋白基因缺少启动子，为了使荧光蛋白基因正常表达，需要在其             （填“Nhe I”或“Mun I”）侧接入启动子；启动子的作用是                                       。

(3)构建基因表达载体的过程中，除了注意酶切后目的基因和载体露出相同的黏性末端，还需要注意连接方向以便表达。据图分析，为了使荧光蛋白基因正常表达，γ基因启动子及其上游的             （填“R”或“F₁”）调控序列应接在荧光蛋白基因的Mun I端，             （填“R”或“F₁”）调控序列应接在荧光蛋白基因的Xho I端。

(4)引物的合成是PCR成功的关键，PCR扩增时，要有                                       ，以便合成引物。制作引物过程中需要注意             之间不能有互补的序列，同一引物内部也不能有互补的序列。