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所属章节:第3节 胚胎工程
【简答题】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的______________________。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到____期时,可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的________设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有__________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的______,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
【答案】:(1)细胞核 (2)囊胚 (3)核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ限制 (4)蛋白质
【解析】:(1)动物细胞核移植技术是将体细胞核移入去核的卵母细胞中。(2)囊胚期细胞开始出现分化,分化为滋养层细胞和内细胞团,内细胞团细胞(即ES细胞)具有发育的全能性。(3)利用PCR技术扩增目的基因时需要设计引物,引物是目的基因的一段核苷酸序列。基因工程中所用表达载体必须具备的条件之一是具有多个限制酶的酶切位点,而Rag2基因是用HindⅢ和PstⅠ限制酶切割获得的,所以所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ限制酶的酶切位点。(4)基因表达的产物是蛋白质,可利用抗原—抗体杂交原理检测Rag2基因的表达情况。