【简答题】纤维素酶主要由内切葡聚糖酶（EG）、外切葡聚糖酶（EH）和β-葡萄糖苷酶（β-G）组成，纤维素酶广泛存在于自然界的细菌和真菌中，用于生产纤维素酶的生物一般是真菌，如木霉属真菌。如图表示从土壤中分离出高产纤维素酶的菌株并克隆表达降解纤维素的EG、EH和β-G的大致流程。回答下列问题：

（1）过程①所用的培养基需添加的唯一碳源是____，在该培养基上可以生长的微生物有________，从这些微生物中挑选出木霉属真菌，常利用菌落的________等特征。
（2）从分离出的木霉属真菌中筛选出高产纤维素酶的菌株时，需在培养基中添加刚果红，其主要作用是____。确定某菌株为高产纤维素酶菌株的依据是________。
（3）过程④大量扩增目的基因，如EG基因、EH基因、β-G基因时，除了需要知道基因两端的部分碱基序列来设计引物之外，还应在引物的5′端添加相关限制酶的识别序列，原因有____（填字母）。
A．目的基因两端没有限制酶的识别序列
B．DNA聚合酶是从引物的3′端连接游离的脱氧核苷酸
C．3′端需要与模板链互补
（4）为了防止目的基因与质粒载体反向拼接，过程⑤常选用2种限制酶切割目的基因和质粒载体，对此两种酶的选择还有其他限制条件，如________________。
（5）过程⑥常用的受体细胞是大肠杆菌，其优点有________（答出2点即可）。

【答案】：（1）纤维素；能分解纤维素的细菌和真菌；形状、大小和颜色
（2）鉴别出纤维素分解菌；该菌株形成的菌落的透明圈直径与菌落直径的比值最大
（3）ABC
（4）两种酶切割DNA形成的不能都是平末端，也不能是相同的黏性末端
（5）繁殖能力强、生理结构和遗传物质简单、对环境因素敏感、容易进行遗传操作等

【解析】：（1）由于过程的目的是分离出木霉属真菌，该真菌能分解纤维素，因此所用培养基中的唯一碳源应该是纤维素。由于高度腐烂木屑覆盖的土壤中有众多细菌和真菌，这些细菌和真菌中都有能分解纤维素的个体，所以在该培养基上可以生长的微生物有能分解纤维素的细菌和真菌。不同微生物在培养基上形成的菌落的特征不同，这些特征包括形状、大小和颜色等。
（2）刚果红能与纤维素形成红色复合物，纤维素分解菌能将红色复合物中的纤维素降解，使红色褪去，因此培养基中添加的刚果红的主要作用是鉴别出纤维素分解菌。透明圈直径与菌落直径的比值最大的菌落，分解纤维素的能力最强。
（3）设计引物不仅要知道基因两端的部分碱基序列，还应在引物的5'端添加相关限制酶的识别序列，原因是目的基因两端没有限制酶的识别序列、DNA聚合酶是从引物的3'端连接游离的脱氧核苷酸，而3'端需要与模板链互补。
（4）用两种限制酶同时切割目的基因和质粒载体时，要求形成的末端不能都是平末端，也不能是相同的黏性末端，否则也不能防止目的基因与质粒载体反向拼接。
（5）大肠杆菌作为受体细胞的优点有：繁殖能力强、生理结构和遗传物质简单、对环境因素敏感、容易进行遗传操作等。