【简答题】

基因工程的关键步骤是基因表达载体的构建，人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。请回答下列问题：

(1)为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达,需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知,在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是_______，在R末端添加的序列所对应的限制酶是_____。本实验中,从产物扩增到载体构建
完成的整个过程共需要____种酶。

(2)将构建的载体导人除去BCL11A基因的受体细胞,成功转化后,含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白,受体细胞有荧光,含
F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是______________。
(3)向培养液中添加适量的雌激素,含F1~F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，而含F5~F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光
若y基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列，据此结果可推测,BCL11A蛋白结合位点位于____________,理由是_______________________。

【答案】：(1)Sal      EcoRI     6
(2)F7与R扩增产物不含完整的启动子,荧光蛋白基因不表达。
(3)F4与F5之间   F1－F4与R均有，故在F4的下游，而F5之后没有荧光，故在F5上游，所以在二者之间