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(1)waxy反义基因片段导入水稻细胞后可抑制内源基因表达，原因是____。为构建反义基因与gus的融合基因，在利用PCR技术获取反义基因与 gus过程中，需要在设计的两对引物____端分别添加限制酶____、____的识别序列。
(2)过程③中将农杆菌1、2按照1：9比例充分混匀感染水稻愈伤组织，3天后转入含有___的选择培养基筛选抗性愈伤组织。抗性愈伤组织转入再生培养基经____形成胚状体，继而发育成 T₀代植株。
(3)提取T₀代植株的基因组 DNA，根据反义基因和 gus基因部分序列设计引物进行PCR1检测， 同时根据反义基因和终止子的部分序列设计引物进行 PCR2检测，结果如下图，其中M为标准参照，1为阳性对照，2为阴性对照，3~8号为抗性植株 DNA的 PCR产物。其中2 是根据____的DNA 为模板进行 PCR 的结果，据图可以确定____号植株为共转化失败的水稻。
(4)过程⑤将共转化成功的 T₀代植株进行自交，收获种子，取半粒种子进行 GUS 检测（gus的表达产物能使白色X-Gluc 水解生成蓝色产物）。选择检测结果为____色的种子种植得到T₁代植株。最终还需检测____，才可判断是否改良成功。
(2)将转化成功的农杆菌与高粱愈伤组织共培养，为筛选出T-DNA成功转入的愈伤组织，培养基中需加入_____，原因是_____。获得所需愈伤组织后，经_____发育成完整植株。同时构建基因敲除植株（AT1-KO）。
(3)检测植株在高碱土壤中的幼苗长势和作物产量，结果发现：相比野生型植株，AT1-KO植株_____，AT1-OE植株表型相反，说明AT1在高粱碱胁迫的响应过程中起负调控作用。
(4)高碱条件下，植物细胞内H2O2含量升高，推测AT1可能与运输H2O2的通道蛋白PIP2有相互作用。利用免疫共沉淀方法进行研究，实验原理如图2，若靶蛋白A和待测蛋白B有相互作用，用磁珠偶联抗A抗体使A沉淀，则B也会被沉淀下来。利用抗GFP抗体与磁珠偶联，对实验组和对照组总蛋白进行免疫共沉淀，实验结果如图3。
②通过条带_____可以判断，AT1与PIP2有相互作用。若想进一步验证该相互作用，可用_____抗体与新磁珠偶联再次进行实验。
(5)细胞内过量的H2O2积累会导致氧化应激，从而导致植物细胞死亡，降低植物存活率。研究显示PIP2磷酸化能够促进H2O2外排。综合上述信息，解释敲除AT1基因能显著提高植株耐盐碱性的原因_____。
人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。下列有关叙述错误的是：
A.为将扩增后的产物定向插入载体,指导荧光蛋白基因表达，需用MunI和XhoI处理载体
B.从产物扩增到载体构建完成的整个过程需构建7种载体
C.将构建的载体导人去除BCLIIA基因的受体细胞,可能出现含F1与R扩增产物的受体细胞无荧光，而含F2－F7与R扩增产物的受体细胞有荧光
D.向培养液中添加适量的雌激素，可导致部分受体细胞不再有荧光
基因工程的关键步骤是基因表达载体的构建，人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。请回答下列问题：
(1)为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达,需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知,在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是________，在R末端添加的序列所对应的限制酶是______。本实验中,从产物扩增到载体构建
完成的整个过程共需要_____种酶。
(2)将构建的载体导人除去BCL11A基因的受体细胞,成功转化后,含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白,受体细胞有荧光,含
F7与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是________________。
(3)向培养液中添加适量的雌激素,含F1~F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，而含F5~F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光
若y基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A蛋白的结合位点序列，据此结果可推测,BCL11A蛋白结合位点位于______________,理由是____________________________。
基因工程的关键步骤是基因表达载体的构建，人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。请回答下列问题：
(1)基因表达载体包括复制原点、目的基因、 （答出3点）。据图可知，扩增的γ基因上游不同长度的片段中，扩增出最长的片段需要选用的引物组合为 。
(2)由于荧光蛋白基因缺少启动子，为了使荧光蛋白基因正常表达，需要在其 （填“Nhe I”或“Mun I”）侧接入启动子；启动子的作用是 。
(3)构建基因表达载体的过程中，除了注意酶切后目的基因和载体露出相同的黏性末端，还需要注意连接方向以便表达。据图分析，为了使荧光蛋白基因正常表达，γ基因启动子及其上游的 （填“R”或“F1”）调控序列应接在荧光蛋白基因的Mun I端， （填“R”或“F1”）调控序列应接在荧光蛋白基因的Xho I端。
(4)引物的合成是PCR成功的关键，PCR扩增时，要有 ，以便合成引物。制作引物过程中需要注意 之间不能有互补的序列，同一引物内部也不能有互补的序列。