【单选题】白细胞介素­2(IL­2)参与移植排斥反应，是免疫调节因子，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。科研人员将含IL­2基因的DNA片段和质粒pPIC9K(部分结构如图所示)构建成重组质粒，并导入酵母菌GS115(组氨酸缺陷菌株)中，筛选到了能分泌IL­2的工程菌株。下列叙述错误的是

 

 
A．组氨酸合成基因可作为标记基因筛选导入重组质粒的酵母菌细胞
B．构建重组质粒时可选用AvrⅡ和NotⅠ切割目的基因和pPIC9K质粒
C．重组质粒导入酵母菌GS115前，需要先用Ca2+处理酵母菌GS115细胞
D．抑制IL­2基因的表达可在一定程度上减轻机体器官移植后的免疫排斥反应

【单选题】乳酸乙酯是白酒中重要的呈香物质，由乳酸脱氢酶催化产生，影响白酒品质和风格。科研人员将酿酒酵母质粒上的丙酮酸脱氢酶基因(PD)替换为植物乳杆菌中的乳酸脱氢酶基因(L­PG)，可获得乳酸乙酯高产菌株，该过程如图所示。下列说法不正确的是

 

A．可借助序列数据库等查询L­PG基因的序列和功能
B．可以利用PCR技术筛选导入了L­PG基因的受体细胞
C．酵母菌PD基因被替换为L­PG基因的过程中发生了基因重组
D．电泳鉴定L­PG基因时，当观察到核酸染料迁移至凝胶边缘时，停止电泳

【单选题】某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。

 

 下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是
A．质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coli  DNA连接酶连接
B．质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4 DNA连接酶连接
C．质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 DNA连接酶连接
D．质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coli DNA连接酶连接

【简答题】编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。
 
回答下列问题：
（1）先要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是_________________________.
（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为_______________，加入了__________作为合成DNA的原料。
（3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。
①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是____________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO₂浓度，CO₂的作用是____________。
②仅根据图1、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少___________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。

【简答题】我国科学家张道远先生通过从耐旱灌木白花柽柳中克隆得到TSOD基因，利用转基因技术转化到棉花中，获得了具备更强抗旱性的T4代转基因棉花株系。下图为转基因抗旱棉花的培育过程示意图，请据图回答：
 
(1)①过程表示用_____扩增目的基因的方法。②过程用到的工具酶有______________。步骤③一般用_____处理农杆菌，使其易吸收周围环境中的DNA分子。
(2)将重组质粒导入棉花细胞除步骤④所示的方法外，还可采用__________。如果受体细胞是动物的受精卵，则一般采用的方法是_________。
(3)外植体培养成为试管苗的过程采用了_________技术，利用了______________的原理，步骤⑤⑥表示___________。
(4)为了确定抗旱转基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素标记的__________作探针进行分子水平鉴定，再__________进行个体水平鉴定棉花植株的抗旱性。