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      题型：单选题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    1

    RT-PCR是在体外从RNA合成互补DNA(cDNA)，再以cDNA为模板扩增DNA 的技术。下列有关说法错误的是
    A.RT-PCR需要逆转录酶和Taq DNA 聚合酶的参与
    B.对温度的控制是影响RT-PCR 能否成功的关键因素之一
    C.若反应体系中混有RNA酶会导致RT-PCR 技术失败
    D.RT-PCR 反应体系中需要添加缓冲液、核糖核苷酸、引物等

     【第 12609 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    RT-PCR是在体外从RNA合成互补DNA(cDNA)，再以cDNA为模板扩增DNA 的技术。下列有关说法错误的是
    A.RT-PCR需要逆转录酶和Taq DNA 聚合酶的参与
    B.对温度的控制是影响RT-PCR 能否成功的关键因素之一
    C.若反应体系中混有RNA酶会导致RT-PCR 技术失败
    D.RT-PCR 反应体系中需要添加缓冲液、核糖核苷酸、引物等
     
      题型：简答题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    2

    纤维素酶主要由内切葡聚糖酶（EG）、外切葡聚糖酶（EH）和β-葡萄糖苷酶（β-G）组成，纤维素酶广泛存在于自然界的细菌和真菌中，用于生产纤维素酶的生物一般是真菌，如木霉属真菌。如图表示从土壤中分离出高产纤维素酶的菌株并克隆表达降解纤维素的EG、EH和β-G的大致流程。回答下列问题：
    Yangzhong Teaching Studio
    （1）过程①所用的培养基需添加的唯一碳源是________，在该培养基上可以生长的微生物有________________，从这些微生物中挑选出木霉属真菌，常利用菌落的________________等特征。
    （2）从分离出的木霉属真菌中筛选出高产纤维素酶的菌株时，需在培养基中添加刚果红，其主要作用是________。确定某菌株为高产纤维素酶菌株的依据是________________。
    （3）过程④大量扩增目的基因，如EG基因、EH基因、β-G基因时，除了需要知道基因两端的部分碱基序列来设计引物之外，还应在引物的5′端添加相关限制酶的识别序列，原因有________（填字母）。
    A．目的基因两端没有限制酶的识别序列
    B．DNA聚合酶是从引物的3′端连接游离的脱氧核苷酸
    C．3′端需要与模板链互补
    （4）为了防止目的基因与质粒载体反向拼接，过程⑤常选用2种限制酶切割目的基因和质粒载体，对此两种酶的选择还有其他限制条件，如________________________________。
    （5）过程⑥常用的受体细胞是大肠杆菌，其优点有________________（答出2点即可）。

     【第 12597 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    纤维素酶主要由内切葡聚糖酶（EG）、外切葡聚糖酶（EH）和β-葡萄糖苷酶（β-G）组成，纤维素酶广泛存在于自然界的细菌和真菌中，用于生产纤维素酶的生物一般是真菌，如木霉属真菌。如图表示从土壤中分离出高产纤维素酶的菌株并克隆表达降解纤维素的EG、EH和β-G的大致流程。回答下列问题：
    Yangzhong Teaching Studio
    （1）过程①所用的培养基需添加的唯一碳源是________，在该培养基上可以生长的微生物有________________，从这些微生物中挑选出木霉属真菌，常利用菌落的________________等特征。
    （2）从分离出的木霉属真菌中筛选出高产纤维素酶的菌株时，需在培养基中添加刚果红，其主要作用是________。确定某菌株为高产纤维素酶菌株的依据是________________。
    （3）过程④大量扩增目的基因，如EG基因、EH基因、β-G基因时，除了需要知道基因两端的部分碱基序列来设计引物之外，还应在引物的5′端添加相关限制酶的识别序列，原因有________（填字母）。
    A．目的基因两端没有限制酶的识别序列
    B．DNA聚合酶是从引物的3′端连接游离的脱氧核苷酸
    C．3′端需要与模板链互补
    （4）为了防止目的基因与质粒载体反向拼接，过程⑤常选用2种限制酶切割目的基因和质粒载体，对此两种酶的选择还有其他限制条件，如________________________________。
    （5）过程⑥常用的受体细胞是大肠杆菌，其优点有________________（答出2点即可）。
     
      题型：简答题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    3

    雌激素(E2)与雌激素受体(ERa)结合成复合物，引发靶细胞生命活动发生一系列变化。推测ERa作为转录因子调节pS2基因转录，进而调节靶细胞的生命活动。为证明该推测，进行了相关研究。分析并回答：
    （1）尽管E2分布于全身的体液中，但人体肾上皮细胞对E2不敏感，分析其原因是该细胞中缺少____________。
    （2）利用____________酶将pS2基因启动子与细菌荧光素酶基因连接，构建融合基因。
    （3）为验证该推测，实验流程及结果如图：
    Yangzhong Teaching Studio
    ①通过______技术将外源DNA导入肾上皮细胞。
    ②乙组肾上皮细胞导入的X基因是______基因。
    ③丙组导入____________，目的是排除其携带的基因对实验结果的干扰。
    ④推测丙组或丁组荧光素酶活性______。
    ⑤该实验结果是否支持“ERa作为转录因子调节pS2基因转录”？______。请陈述理由。_________________________________________

     【第 12596 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    雌激素(E2)与雌激素受体(ERa)结合成复合物，引发靶细胞生命活动发生一系列变化。推测ERa作为转录因子调节pS2基因转录，进而调节靶细胞的生命活动。为证明该推测，进行了相关研究。分析并回答：
    （1）尽管E2分布于全身的体液中，但人体肾上皮细胞对E2不敏感，分析其原因是该细胞中缺少____________。
    （2）利用____________酶将pS2基因启动子与细菌荧光素酶基因连接，构建融合基因。
    （3）为验证该推测，实验流程及结果如图：
    Yangzhong Teaching Studio
    ①通过______技术将外源DNA导入肾上皮细胞。
    ②乙组肾上皮细胞导入的X基因是______基因。
    ③丙组导入____________，目的是排除其携带的基因对实验结果的干扰。
    ④推测丙组或丁组荧光素酶活性______。
    ⑤该实验结果是否支持“ERa作为转录因子调节pS2基因转录”？______。请陈述理由。_________________________________________
     
      题型：简答题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    4

    某些膜内蛋白以紧密排列的方阵形式存在称为OAPs，OAPs的分布异常与某些神经性和神经肌肉性疾病相关。研究AQP4（一种水通道蛋白）与OAPs结构形成的关系，有助于揭示上述疾病的机制。请回答问题：

    （1）AQP4有M1和M23。两种分子量相近的亚型，二者均可独立构成四聚体发挥作用。科研人员发现导入并稳定表达M23基因的细胞，其细胞膜上有OAPs形成，而敲除该基因的细胞中未见OAPs的形成，该结果表明__________________________________________。

    （2）科研人员继续对M1与OAPs形成的关系进行了研究。

    ①提取大鼠脑组织的总RNA，通过__________获得cDNA，并通过__________技术获得M1基因。

    ②将M1基因与质粒用__________________酶构建基因表达载体，导入中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中，用________________技术检测到受体细胞已成功表达M1蛋白。

    ③科研人员继续实验，方案及结果如下。

    实验分组

    1对照组

    2对照组

    3实验组

    实验处理

      a 

      b 

    导入M1基因的CHO细胞

    培养一段时间后裂解细胞并离心，取上清液中蛋白

    检测指标

    用电泳技术检测  c  的形成情况

    Yangzhong Teaching Studio

    请将表格中的实验方案补充完整。

    a：__________________________

    b：__________________________

    c：__________________________

    （3）综合上述实验结果，AQP4与OAPs形成的关系为______________________________________________。


     【第 12595 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    某些膜内蛋白以紧密排列的方阵形式存在称为OAPs，OAPs的分布异常与某些神经性和神经肌肉性疾病相关。研究AQP4（一种水通道蛋白）与OAPs结构形成的关系，有助于揭示上述疾病的机制。请回答问题：

    （1）AQP4有M1和M23。两种分子量相近的亚型，二者均可独立构成四聚体发挥作用。科研人员发现导入并稳定表达M23基因的细胞，其细胞膜上有OAPs形成，而敲除该基因的细胞中未见OAPs的形成，该结果表明__________________________________________。

    （2）科研人员继续对M1与OAPs形成的关系进行了研究。

    ①提取大鼠脑组织的总RNA，通过__________获得cDNA，并通过__________技术获得M1基因。

    ②将M1基因与质粒用__________________酶构建基因表达载体，导入中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中，用________________技术检测到受体细胞已成功表达M1蛋白。

    ③科研人员继续实验，方案及结果如下。

    实验分组

    1对照组

    2对照组

    3实验组

    实验处理

      a 

      b 

    导入M1基因的CHO细胞

    培养一段时间后裂解细胞并离心，取上清液中蛋白

    检测指标

    用电泳技术检测  c  的形成情况

    Yangzhong Teaching Studio

    请将表格中的实验方案补充完整。

    a：__________________________

    b：__________________________

    c：__________________________

    （3）综合上述实验结果，AQP4与OAPs形成的关系为______________________________________________。


     
      题型：简答题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    5

    AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)是人体代谢的总开关，通过磷酸化下游多种蛋白质来调控细胞代谢。二甲双胍(Met)是目前应用最广泛的降糖药物，近年来，还陆续发现各种潜在功效。研究表明Met主要通过激活AMPK通路发挥作用。我国科学家针对Met的作用靶点进行了相关研究。
    （1）AMP（腺苷一磷酸）可由ATP水解失去______个磷酸基团获得，当细胞缺少能量供应时，AMP/ATP比值升高，磷酸化激活AMPK(P-AMPK)，维持机体能量平衡。以往认为Met通过抑制位于__________________的有氧呼吸第三阶段而发挥作用。研究者将5 μmol/L的Met注入体外培养的小鼠干细胞，检测结果如图1。

    Yangzhong Teaching Studio
    实验数据显示___________________________，故Met并非通过提高AMP/ATP的比值激活AMPK。
    （2）研究发现，加入Met后，胞内溶酶体膜质子泵活性降低。为探究Met的靶蛋白是否定位于溶酶体膜，研究者设计了“MET-P”探针寻找特定的靶蛋白，其机理如图2。
    Yangzhong Teaching Studio

    ①利用“MET-P”探针钓取靶蛋白的原理为_________________________________________。
    ②经纯化、分析，确定PEN2为Met的靶蛋白。二者结合后，与溶酶体质子泵的ATP6AP1亚基结合形成复合体，导致质子泵__________________改变，最终使溶酶体上的AMPK被磷酸化激活。请利用基因工程的方法验证Met通过靶蛋白PEN2，最终激活AMPK。写出实验组的设计思路及预期结果：______________________________________。
    （3）除溶酶体外，细胞质基质、线粒体内也有AMPK，分别在中等和重度能量不足时被激活。一些药物能全面激活细胞内AMPK，使AMPK磷酸化水平整体升高，造成不良反应。结合本文信息，请表述Met在治疗代谢性疾病中的优势：_____________________________________________。

     【第 12594 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)是人体代谢的总开关，通过磷酸化下游多种蛋白质来调控细胞代谢。二甲双胍(Met)是目前应用最广泛的降糖药物，近年来，还陆续发现各种潜在功效。研究表明Met主要通过激活AMPK通路发挥作用。我国科学家针对Met的作用靶点进行了相关研究。
    （1）AMP（腺苷一磷酸）可由ATP水解失去______个磷酸基团获得，当细胞缺少能量供应时，AMP/ATP比值升高，磷酸化激活AMPK(P-AMPK)，维持机体能量平衡。以往认为Met通过抑制位于__________________的有氧呼吸第三阶段而发挥作用。研究者将5 μmol/L的Met注入体外培养的小鼠干细胞，检测结果如图1。

    Yangzhong Teaching Studio
    实验数据显示___________________________，故Met并非通过提高AMP/ATP的比值激活AMPK。
    （2）研究发现，加入Met后，胞内溶酶体膜质子泵活性降低。为探究Met的靶蛋白是否定位于溶酶体膜，研究者设计了“MET-P”探针寻找特定的靶蛋白，其机理如图2。
    Yangzhong Teaching Studio

    ①利用“MET-P”探针钓取靶蛋白的原理为_________________________________________。
    ②经纯化、分析，确定PEN2为Met的靶蛋白。二者结合后，与溶酶体质子泵的ATP6AP1亚基结合形成复合体，导致质子泵__________________改变，最终使溶酶体上的AMPK被磷酸化激活。请利用基因工程的方法验证Met通过靶蛋白PEN2，最终激活AMPK。写出实验组的设计思路及预期结果：______________________________________。
    （3）除溶酶体外，细胞质基质、线粒体内也有AMPK，分别在中等和重度能量不足时被激活。一些药物能全面激活细胞内AMPK，使AMPK磷酸化水平整体升高，造成不良反应。结合本文信息，请表述Met在治疗代谢性疾病中的优势：_____________________________________________。
     
      题型：简答题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    6

    将天然Ti质粒改造成含有Vir基因的辅助质粒（作用为辅助T-DNA转移）和不含有Vir基因、含有T-DNA的穿梭质粒，共同转入农杆菌，可提高转化效率。细菌和棉花对密码子偏好不同，为提高翻译效率，增强棉花抗病虫害能力，进行下图所示操作。
     Yangzhong Teaching Studio
    注：F1～F3，R1～R3表示引物；T-DNA-LB表示T-DNA左边界；T-DNA-RB表示T-DNA右边界；Ori表示复制原点；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。
    请分析并回答下列问题：
    (1)本操作中获取目的基因的方法有______________________。
    (2)根据图中穿梭质粒上的KanR和HygBR两个标记基因的位置，用___________（选填“卡那霉素”或“潮霉素B”）初步筛选转化的棉花愈伤组织。
    (3)为检测棉花植株是否导入目的基因，提取棉花植株染色体DNA作模板，进行PCR，应选用的引物是___________。
    (4)穿梭质粒中通过使用两个p35s启动子，可以增加______________________的结合位点，从而提高目的基因的转录效率，合成更多的mRNA，进而增加蛋白质的表达量。
    (5)对T-DNA边界序列进行测序发现，在连接的T-DNA部分中，RB通常比LB更精确完整。RB连接序列更完整是因为与RB共价连接的VirD2蛋白可以保护它免受核酸外切酶消化。而较大的LB序列缺失是因为LB末端区域缺乏保护。为了直观地显示T-DNA的转移是否完整，可用绿色荧光蛋白基因（GFP）作为报告基因，构建在紧邻    ___________（选填“左”或“右”）边界的位置。
    (6)本研究采用的部分生物技术属于蛋白质工程，理由是______。
    A．通过含有双质粒的农杆菌转化棉花细胞
    B．将苏云金杆菌Bt基因导入棉花细胞中表达
    C．将1～1362基因序列改变为棉花细胞偏好密码子的基因序列
    D．用1～1362合成基因序列和1363～1848天然基因序列获得改造的抗虫蛋白

     【第 12579 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    将天然Ti质粒改造成含有Vir基因的辅助质粒（作用为辅助T-DNA转移）和不含有Vir基因、含有T-DNA的穿梭质粒，共同转入农杆菌，可提高转化效率。细菌和棉花对密码子偏好不同，为提高翻译效率，增强棉花抗病虫害能力，进行下图所示操作。

     Yangzhong Teaching Studio
    注：F1～F3，R1～R3表示引物；T-DNA-LB表示T-DNA左边界；T-DNA-RB表示T-DNA右边界；Ori表示复制原点；KanR表示卡那霉素抗性基因；HygBR表示潮霉素B抗性基因。
    请分析并回答下列问题：
    (1)本操作中获取目的基因的方法有______________________。
    (2)根据图中穿梭质粒上的KanR和HygBR两个标记基因的位置，用___________（选填“卡那霉素”或“潮霉素B”）初步筛选转化的棉花愈伤组织。
    (3)为检测棉花植株是否导入目的基因，提取棉花植株染色体DNA作模板，进行PCR，应选用的引物是___________。
    (4)穿梭质粒中通过使用两个p35s启动子，可以增加______________________的结合位点，从而提高目的基因的转录效率，合成更多的mRNA，进而增加蛋白质的表达量。
    (5)对T-DNA边界序列进行测序发现，在连接的T-DNA部分中，RB通常比LB更精确完整。RB连接序列更完整是因为与RB共价连接的VirD2蛋白可以保护它免受核酸外切酶消化。而较大的LB序列缺失是因为LB末端区域缺乏保护。为了直观地显示T-DNA的转移是否完整，可用绿色荧光蛋白基因（GFP）作为报告基因，构建在紧邻    ___________（选填“左”或“右”）边界的位置。
    (6)本研究采用的部分生物技术属于蛋白质工程，理由是______。
    A．通过含有双质粒的农杆菌转化棉花细胞
    B．将苏云金杆菌Bt基因导入棉花细胞中表达
    C．将1～1362基因序列改变为棉花细胞偏好密码子的基因序列
    D．用1～1362合成基因序列和1363～1848天然基因序列获得改造的抗虫蛋白
     
      题型：简答题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    7

    长叶烯是重质松节油的主要成分，具有木香和龙涎香气，溶于甲苯，不溶于水，是合成香料、合成树脂和高能燃料的重要原料。尽管资源分布广泛，但长叶烯的产量有限，工业化生产受到限制，微生物发酵则为合成长叶烯提供了绿色可持续的途径。现有研究以大肠杆菌内源的MEP途径为基础，以法尼基焦磷酸(FPP) 为直接前体物质，在异源长叶烯合酶(lgfs) 的催化作用下环化合成长叶烯。此过程的调控策略有：①引入经密码子优化的lgfs，②过表达大肠杆菌FPP合成过程中关键酶基因idi、ispA ，提高前体物FPP的供应量，③加强大肠杆菌内源MEP途径2个关键酶基因dxs、dxr 的表达。请回答下列问题：

    （1）为构建如图甲所示的重组pET28a-lgfs表达载体，需先将经密码子优化的lgfs 基因通过PCR特异性扩增，用于扩增lgfs 基因的引物是指_______________________________________。为使PCR 产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的____________（填“3'端”或“5' 端”）。


    Yangzhong Teaching Studio

    注:ori:复制原点;KanR:卡那霉素抗性基因;erg20:酿酒酵母来源的FPP 合酶关键酶基因

    （2）除图甲中标出的结构外，作为载体，质粒还需具备的结构有_________________________________（答出2个结构即可）。将得到的重组pET28a-lgfs 表达载体、重组pET28a-lgfs-ispA-idi表达载体、重组pET28a-lgfs-erg20-idi 表达载体、重组pET28a-lgfs-ispA-idi表达载体+重组pET28a-dxs-dxr 表达载体，分别转入经______________________________处理的大肠杆菌，构建出重组菌株A、重组菌株B、重组菌株C、重组菌株D。

    （3）将各重组菌株分别发酵后，检测不同发酵时长发酵样品中所含长叶烯的产量，结果如图乙所示。


    Yangzhong Teaching Studio

    已知生成1 mol FPP 需要2 mol异戊烯基焦磷酸(IPP)和1 mol二甲基烯丙基二磷酸(DMAPP) ，而MEP途径所产生的IPP与DMAPP摩尔比为5:1，过表达基因idi 会使IPP和DMAPP的消耗和形成达到平衡转换，从而直接影响FPP 的合成。另外，为避免IPP与DMAPP的积累对细胞生长产生毒性，需要加强FPP 合酶的表达，在此，采用了2种不同来源FPP合酶，即大肠杆菌ispA和酿酒酵母来源的erg20 进行加强，根据图乙结果推测ispA表达效果要优于erg20 ，判断依据是_______________________________。在采用ispA 的基础上，通过____________________，还可以使长叶烯产量得到显著提高。

    （4）为验证代谢途径中各关键酶基因的转录水平能够影响长叶烯的产量，请写出关键实验步骤：①___________________；②_______________；③荧光定量PCR 。

     【第 12556 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    长叶烯是重质松节油的主要成分，具有木香和龙涎香气，溶于甲苯，不溶于水，是合成香料、合成树脂和高能燃料的重要原料。尽管资源分布广泛，但长叶烯的产量有限，工业化生产受到限制，微生物发酵则为合成长叶烯提供了绿色可持续的途径。现有研究以大肠杆菌内源的MEP途径为基础，以法尼基焦磷酸(FPP) 为直接前体物质，在异源长叶烯合酶(lgfs) 的催化作用下环化合成长叶烯。此过程的调控策略有：①引入经密码子优化的lgfs，②过表达大肠杆菌FPP合成过程中关键酶基因idi、ispA ，提高前体物FPP的供应量，③加强大肠杆菌内源MEP途径2个关键酶基因dxs、dxr 的表达。请回答下列问题：

    （1）为构建如图甲所示的重组pET28a-lgfs表达载体，需先将经密码子优化的lgfs 基因通过PCR特异性扩增，用于扩增lgfs 基因的引物是指_______________________________________。为使PCR 产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的____________（填“3'端”或“5' 端”）。


    Yangzhong Teaching Studio

    注:ori:复制原点;KanR:卡那霉素抗性基因;erg20:酿酒酵母来源的FPP 合酶关键酶基因

    （2）除图甲中标出的结构外，作为载体，质粒还需具备的结构有_________________________________（答出2个结构即可）。将得到的重组pET28a-lgfs 表达载体、重组pET28a-lgfs-ispA-idi表达载体、重组pET28a-lgfs-erg20-idi 表达载体、重组pET28a-lgfs-ispA-idi表达载体+重组pET28a-dxs-dxr 表达载体，分别转入经______________________________处理的大肠杆菌，构建出重组菌株A、重组菌株B、重组菌株C、重组菌株D。

    （3）将各重组菌株分别发酵后，检测不同发酵时长发酵样品中所含长叶烯的产量，结果如图乙所示。


    Yangzhong Teaching Studio

    已知生成1 mol FPP 需要2 mol异戊烯基焦磷酸(IPP)和1 mol二甲基烯丙基二磷酸(DMAPP) ，而MEP途径所产生的IPP与DMAPP摩尔比为5:1，过表达基因idi 会使IPP和DMAPP的消耗和形成达到平衡转换，从而直接影响FPP 的合成。另外，为避免IPP与DMAPP的积累对细胞生长产生毒性，需要加强FPP 合酶的表达，在此，采用了2种不同来源FPP合酶，即大肠杆菌ispA和酿酒酵母来源的erg20 进行加强，根据图乙结果推测ispA表达效果要优于erg20 ，判断依据是_______________________________。在采用ispA 的基础上，通过____________________，还可以使长叶烯产量得到显著提高。

    （4）为验证代谢途径中各关键酶基因的转录水平能够影响长叶烯的产量，请写出关键实验步骤：①___________________；②_______________；③荧光定量PCR 。
     
      题型：简答题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    8

    稻米的直链淀粉是由蜡质基因（waxy）控制合成的淀粉合成酶（GBSS）催化形成，直链淀粉含量高的米饭质地和适口性不高。将 waxy反义基因片段导入水稻细胞抑制内源基因表达，可降低直链淀粉含量。为防止同时导入的标记基因影响，科研人员构建了2种载体，通过共转化以期获得含有目的基因、不含标记基因和报告基因（gus）的转基因水稻，相关流程如下图。请回答下列问题。
    Yangzhong Teaching Studio
    (1)waxy反义基因片段导入水稻细胞后可抑制内源基因表达，原因是____。为构建反义基因与gus的融合基因，在利用PCR技术获取反义基因与 gus过程中，需要在设计的两对引物____端分别添加限制酶____、____的识别序列。
    (2)过程③中将农杆菌1、2按照1：9比例充分混匀感染水稻愈伤组织，3天后转入含有___的选择培养基筛选抗性愈伤组织。抗性愈伤组织转入再生培养基经____形成胚状体，继而发育成 T₀代植株。
    (3)提取T₀代植株的基因组 DNA，根据反义基因和 gus基因部分序列设计引物进行PCR1检测， 同时根据反义基因和终止子的部分序列设计引物进行 PCR2检测，结果如下图，其中M为标准参照，1为阳性对照，2为阴性对照，3~8号为抗性植株 DNA的 PCR产物。其中2 是根据____的DNA 为模板进行 PCR 的结果，据图可以确定____号植株为共转化失败的水稻。
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    (4)过程⑤将共转化成功的 T₀代植株进行自交，收获种子，取半粒种子进行 GUS 检测（gus的表达产物能使白色X-Gluc 水解生成蓝色产物）。选择检测结果为____色的种子种植得到T₁代植株。最终还需检测____，才可判断是否改良成功。

     【第 12537 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    稻米的直链淀粉是由蜡质基因（waxy）控制合成的淀粉合成酶（GBSS）催化形成，直链淀粉含量高的米饭质地和适口性不高。将 waxy反义基因片段导入水稻细胞抑制内源基因表达，可降低直链淀粉含量。为防止同时导入的标记基因影响，科研人员构建了2种载体，通过共转化以期获得含有目的基因、不含标记基因和报告基因（gus）的转基因水稻，相关流程如下图。请回答下列问题。
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    (1)waxy反义基因片段导入水稻细胞后可抑制内源基因表达，原因是____。为构建反义基因与gus的融合基因，在利用PCR技术获取反义基因与 gus过程中，需要在设计的两对引物____端分别添加限制酶____、____的识别序列。
    (2)过程③中将农杆菌1、2按照1：9比例充分混匀感染水稻愈伤组织，3天后转入含有___的选择培养基筛选抗性愈伤组织。抗性愈伤组织转入再生培养基经____形成胚状体，继而发育成 T₀代植株。
    (3)提取T₀代植株的基因组 DNA，根据反义基因和 gus基因部分序列设计引物进行PCR1检测， 同时根据反义基因和终止子的部分序列设计引物进行 PCR2检测，结果如下图，其中M为标准参照，1为阳性对照，2为阴性对照，3~8号为抗性植株 DNA的 PCR产物。其中2 是根据____的DNA 为模板进行 PCR 的结果，据图可以确定____号植株为共转化失败的水稻。
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    (4)过程⑤将共转化成功的 T₀代植株进行自交，收获种子，取半粒种子进行 GUS 检测（gus的表达产物能使白色X-Gluc 水解生成蓝色产物）。选择检测结果为____色的种子种植得到T₁代植株。最终还需检测____，才可判断是否改良成功。
     
      题型：简答题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    9

    土壤盐碱化问题已经成为全球性难题，培育耐盐碱农作物是解决人类粮食安全和农业发展的重要途径。

    (1)为研究高粱盐碱响应通路中相关基因AT1的作用，研究人员构建过表达植株（AT1-OE）。以高粱cDNA为模板，利用_____方法获取目的基因。如图1，选取最佳限制酶_____处理目的基因和质粒，构建重组质粒并转入农杆菌。
    (2)将转化成功的农杆菌与高粱愈伤组织共培养，为筛选出T-DNA成功转入的愈伤组织，培养基中需加入_____，原因是_____。获得所需愈伤组织后，经_____发育成完整植株。同时构建基因敲除植株（AT1-KO）。
    (3)检测植株在高碱土壤中的幼苗长势和作物产量，结果发现：相比野生型植株，AT1-KO植株_____，AT1-OE植株表型相反，说明AT1在高粱碱胁迫的响应过程中起负调控作用。
    (4)高碱条件下，植物细胞内H2O2含量升高，推测AT1可能与运输H2O2的通道蛋白PIP2有相互作用。利用免疫共沉淀方法进行研究，实验原理如图2，若靶蛋白A和待测蛋白B有相互作用，用磁珠偶联抗A抗体使A沉淀，则B也会被沉淀下来。利用抗GFP抗体与磁珠偶联，对实验组和对照组总蛋白进行免疫共沉淀，实验结果如图3。

    ①检测总蛋白的目的是_____。
    ②通过条带_____可以判断，AT1与PIP2有相互作用。若想进一步验证该相互作用，可用_____抗体与新磁珠偶联再次进行实验。
    (5)细胞内过量的H2O2积累会导致氧化应激，从而导致植物细胞死亡，降低植物存活率。研究显示PIP2磷酸化能够促进H2O2外排。综合上述信息，解释敲除AT1基因能显著提高植株耐盐碱性的原因_____。

     【第 12536 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    土壤盐碱化问题已经成为全球性难题，培育耐盐碱农作物是解决人类粮食安全和农业发展的重要途径。

    (1)为研究高粱盐碱响应通路中相关基因AT1的作用，研究人员构建过表达植株（AT1-OE）。以高粱cDNA为模板，利用_____方法获取目的基因。如图1，选取最佳限制酶_____处理目的基因和质粒，构建重组质粒并转入农杆菌。
    (2)将转化成功的农杆菌与高粱愈伤组织共培养，为筛选出T-DNA成功转入的愈伤组织，培养基中需加入_____，原因是_____。获得所需愈伤组织后，经_____发育成完整植株。同时构建基因敲除植株（AT1-KO）。
    (3)检测植株在高碱土壤中的幼苗长势和作物产量，结果发现：相比野生型植株，AT1-KO植株_____，AT1-OE植株表型相反，说明AT1在高粱碱胁迫的响应过程中起负调控作用。
    (4)高碱条件下，植物细胞内H2O2含量升高，推测AT1可能与运输H2O2的通道蛋白PIP2有相互作用。利用免疫共沉淀方法进行研究，实验原理如图2，若靶蛋白A和待测蛋白B有相互作用，用磁珠偶联抗A抗体使A沉淀，则B也会被沉淀下来。利用抗GFP抗体与磁珠偶联，对实验组和对照组总蛋白进行免疫共沉淀，实验结果如图3。

    ①检测总蛋白的目的是_____。
    ②通过条带_____可以判断，AT1与PIP2有相互作用。若想进一步验证该相互作用，可用_____抗体与新磁珠偶联再次进行实验。
    (5)细胞内过量的H2O2积累会导致氧化应激，从而导致植物细胞死亡，降低植物存活率。研究显示PIP2磷酸化能够促进H2O2外排。综合上述信息，解释敲除AT1基因能显著提高植株耐盐碱性的原因_____。
     
      题型：单选题   难度值：1 [0]  知识点：第2节 基因工程的基本操作.. 
    【试题】

    10

    人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。下列有关叙述错误的是：

    Yangzhong Teaching Studio

    A.为将扩增后的产物定向插入载体,指导荧光蛋白基因表达，需用MunI和XhoI处理载体
    B.从产物扩增到载体构建完成的整个过程需构建7种载体
    C.将构建的载体导人去除BCLIIA基因的受体细胞,可能出现含F1与R扩增产物的受体细胞无荧光，而含F2－F7与R扩增产物的受体细胞有荧光
    D.向培养液中添加适量的雌激素，可导致部分受体细胞不再有荧光

     【第 12535 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序  
    【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】  【关闭答案】    ﹤﹤上题    下题﹥﹥      CLOSE  

     

    人类γ基因启动子及其上游的调控序列中存在着BCL11A蛋白结合位点，该位点结合BCL11A蛋白后，γ基因的表达被抑制。为了确定BCL11A蛋白结合位点的具体位置，科研人员用PCR技术扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，相关信息如图所示。下列有关叙述错误的是：

    Yangzhong Teaching Studio

    A.为将扩增后的产物定向插入载体,指导荧光蛋白基因表达，需用MunI和XhoI处理载体
    B.从产物扩增到载体构建完成的整个过程需构建7种载体
    C.将构建的载体导人去除BCLIIA基因的受体细胞,可能出现含F1与R扩增产物的受体细胞无荧光，而含F2－F7与R扩增产物的受体细胞有荧光
    D.向培养液中添加适量的雌激素，可导致部分受体细胞不再有荧光

     
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