| 题型：单选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | |  |
| 【试题】 51 | 为研究玉米的抗逆机制，科研人员利用图中的双分子荧光互补技术分析玉米M5与B72蛋白的相互作用。下列说法正确的是
A．直接将YFP剪切为N端和C端后，分别与M5和B72蛋白连接
B．设计特异性引物以玉米cDNA为模板扩增M5和B72基因
C．将M5和B72基因融合后连接到质粒上的YFP基因中
D．将含有M5和B72的基因表达载体分别导入不同细胞中  【第 12034 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
为研究玉米的抗逆机制，科研人员利用图中的双分子荧光互补技术分析玉米M5与B72蛋白的相互作用。下列说法正确的是
A．直接将YFP剪切为N端和C端后，分别与M5和B72蛋白连接
B．设计特异性引物以玉米cDNA为模板扩增M5和B72基因
C．将M5和B72基因融合后连接到质粒上的YFP基因中
D．将含有M5和B72的基因表达载体分别导入不同细胞中 |
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| 题型：简答题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 52 | 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒上相关限制酶的酶切位点如图甲所示，电泳检测结果如图乙所示。回答下列问题：
(1)操作过程中需要用到的工具有___________，构建表达载体时应选用_____________这两种限制酶处理质粒。
(2)为保证通过mRNA逆转录获得的光敏色素基因A和质粒的充分连接，一般需要在该基因上、下游引物的___________端分别添加酶切位点。一般在这两部位添加不同的酶切位点，主要目的是___________。
(3)A同学认为仅由图乙电泳结果不能确定1、3、4号转基因棉花均培育成功，理由是_________。
(4)在生物学领域，对光敏色素进行分子改造使用的技术是蛋白质工程。获得光敏色素分子的基本途径为：____________→设计预期的光敏色素的分子结构→推测应有的___________→找到相对应的脱氧核苷酸序列。 【第 12033 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
【参考答案】(1)限制性内切核酸酶(限制酶)、DNA连接酶和载体BcI和HindⅢ
(2)5'使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连
(3)由图乙可知1、3、4号均成功导入光敏色素基因A，但转基因棉花是否培育成功还需要进行生物个体水平上的鉴定
(4) 预期的光敏色素的功能 氨基酸序列
光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒上相关限制酶的酶切位点如图甲所示，电泳检测结果如图乙所示。回答下列问题：
(1)操作过程中需要用到的工具有___________，构建表达载体时应选用_____________这两种限制酶处理质粒。
(2)为保证通过mRNA逆转录获得的光敏色素基因A和质粒的充分连接，一般需要在该基因上、下游引物的___________端分别添加酶切位点。一般在这两部位添加不同的酶切位点，主要目的是___________。
(3)A同学认为仅由图乙电泳结果不能确定1、3、4号转基因棉花均培育成功，理由是_________。
(4)在生物学领域，对光敏色素进行分子改造使用的技术是蛋白质工程。获得光敏色素分子的基本途径为：____________→设计预期的光敏色素的分子结构→推测应有的___________→找到相对应的脱氧核苷酸序列。
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 53 | 水蛭素是一种可用于预防和治疗血栓的蛋白质。若用赖氨酸（密码子为AAA、AAG）替换水蛭素第47位的天冬酰胺（密码子为AAC、AAU）后可以提高它的抗凝血活性。某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因的第47位点引入特定突变后（原理见图），合成了大量抗凝血活性增强的水蛭素。下列相关叙述正确的是
A．若原基因拟突变位点的碱基对为A-T，则让其突变为T-A后即能达到目的
B．除图示物质外，过程②、③和⑤还需提供含Mg2+的缓冲液、热稳定性DNA聚合酶和4种脱氧核苷酸
C．过程②和③可在同一反应容器内同时进行，过程⑤的引物可使用引物1和引物4
D．突变后的水蛭素基因需要与载体结合，并将其导入受体细胞内进行表达，才能获得相应的蛋白质产品 【第 12032 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
水蛭素是一种可用于预防和治疗血栓的蛋白质。若用赖氨酸（密码子为AAA、AAG）替换水蛭素第47位的天冬酰胺（密码子为AAC、AAU）后可以提高它的抗凝血活性。某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因的第47位点引入特定突变后（原理见图），合成了大量抗凝血活性增强的水蛭素。下列相关叙述正确的是
A．若原基因拟突变位点的碱基对为A-T，则让其突变为T-A后即能达到目的
B．除图示物质外，过程②、③和⑤还需提供含Mg2+的缓冲液、热稳定性DNA聚合酶和4种脱氧核苷酸
C．过程②和③可在同一反应容器内同时进行，过程⑤的引物可使用引物1和引物4
D．突变后的水蛭素基因需要与载体结合，并将其导入受体细胞内进行表达，才能获得相应的蛋白质产品
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 54 | 亚洲棉的突变型光籽和野生型毛籽是-对相对性状，研究发现，亚洲棉某突变体的光籽表型与8号染色体的~880kb至~903kb区间相关，研究人员根据野生型毛籽棉的该区间设计连续的重叠引物进行PCR，产物扩增结果如图所示，下列说法正确的是
A．应提取该突变体和野生型亚洲棉的全部染色体DNA进行PCR
B．上图中PCR产物的鉴定是通过琼脂糖凝胶电泳来进行的
C．据图分析可知，分子量较大的扩增产物与点样处的距离较小
D．该突变体出现的根本原因是第6对引物对应区间发生了基因突变 【第 12031 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
亚洲棉的突变型光籽和野生型毛籽是-对相对性状，研究发现，亚洲棉某突变体的光籽表型与8号染色体的~880kb至~903kb区间相关，研究人员根据野生型毛籽棉的该区间设计连续的重叠引物进行PCR，产物扩增结果如图所示，下列说法正确的是
A．应提取该突变体和野生型亚洲棉的全部染色体DNA进行PCR
B．上图中PCR产物的鉴定是通过琼脂糖凝胶电泳来进行的
C．据图分析可知，分子量较大的扩增产物与点样处的距离较小
D．该突变体出现的根本原因是第6对引物对应区间发生了基因突变
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 55 | 蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应的DM片段结构示意图，其中14表示A上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述错误的是
A．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏2个磷酸二酯键
B．若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、4分别是2种引物结合的位置
C．若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca2+处理，更利于实现转化
D．在PCR扩增仪中根据选定的引物至少需经过7次循环才可获得32个两条链等长的目的基因片段 【第 12030 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应的DM片段结构示意图，其中14表示A上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述错误的是
A．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏2个磷酸二酯键
B．若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、4分别是2种引物结合的位置
C．若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca2+处理，更利于实现转化
D．在PCR扩增仪中根据选定的引物至少需经过7次循环才可获得32个两条链等长的目的基因片段
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 56 | IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿的IKKβ基因编码区第1183位碱基T突变为C．为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术获得突变基因，如图所示。下列说法正确的是
A．PCR1中使用的引物有引物A、引物C
B．PCR2中使用的引物有引物B、大引物a
C．PCR1过程需要扩增3轮才能获得目标产物
D．PCR2过程中，为减少错误DNA片段的产生可适当升高复性温度 【第 12029 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿的IKKβ基因编码区第1183位碱基T突变为C．为研究该患儿发病机制，研究人员应用大引物PCR定点诱变技术获得突变基因，如图所示。下列说法正确的是
A．PCR1中使用的引物有引物A、引物C
B．PCR2中使用的引物有引物B、大引物a
C．PCR1过程需要扩增3轮才能获得目标产物
D．PCR2过程中，为减少错误DNA片段的产生可适当升高复性温度
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 57 | 重叠延伸PCR技术是设计含突变点的互补核苷酸片段作为引物，在PCR过程中，互补的核苷酸片段形成重叠，重叠的部分互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得突变基因的方法。科研人员将枯草芽孢杆菌的甘油激酶的第270位氨基酸M突变为1，构建出了对甘油高效利用的枯草芽孢杆菌。下列说法正确的是
A．通过PCR1获得产物AB需要进行2轮PCR扩增
B．无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD
C．在同一反应体系中加入四种引物可以同时获得大量产物AB和CD
D．获取目的基因后，构建质粒载体，形成基因表达载体。基因表达载体上保证其能在宿主细胞中扩增的结构是复制原点，保证目的基因能正常转录的结构是启动子和终止子 【第 12028 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
重叠延伸PCR技术是设计含突变点的互补核苷酸片段作为引物，在PCR过程中，互补的核苷酸片段形成重叠，重叠的部分互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得突变基因的方法。科研人员将枯草芽孢杆菌的甘油激酶的第270位氨基酸M突变为1，构建出了对甘油高效利用的枯草芽孢杆菌。下列说法正确的是
A．通过PCR1获得产物AB需要进行2轮PCR扩增
B．无法通过AB下链和CD上链获得突变产物AD
C．在同一反应体系中加入四种引物可以同时获得大量产物AB和CD
D．获取目的基因后，构建质粒载体，形成基因表达载体。基因表达载体上保证其能在宿主细胞中扩增的结构是复制原点，保证目的基因能正常转录的结构是启动子和终止子
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| 题型：简答题 难度值：1 [0] 知识点：第3节 基因工程的应用 | | | |
| 【试题】 58 | 抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。
(1)构建含除草剂抗性基因的表达载体，传统的方法是目的基因通过限制酶和____________酶与载体进行重组。载体上目的基因插入位点的限制酶识别序列________(填“能”或“不能”)出现在目的基因内部，可通过________技术在目的基因两侧添加相应限制酶识别序列，以便构建表达载体。
(2)为了减少限制酶识别序列的影响，科研人员研发了新的DNA重组方法：无缝克隆技术(图2)，其中InFusion酶可以将任何具有相同15 bp末端序列的线性DNA分子进行连接，类似同源重组。
①科研人员希望应用以上方法构建含有A和GUS基因的重组DNA分子，首先获得了3种DNA分子如图3，然后混合进行InFusion反应。
如果引物2上额外添加的片段对应GUS基因中加粗的e片段，那么引物1和引物4上额外增加的片段分别对应载体中的片段________。完成重组反应后，将重组表达载体加入经过________处理的农杆菌中。
②为筛选成功转入重组DNA分子的菌落，可以选取引物________扩增目的基因并电泳检测。请在图4中画出阳性菌落的电泳结果。
(3)农杆菌转化愈伤组织时，用含________的选择培养基筛选转化的愈伤组织。转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织(假阳性)也可能在选择培养基上生长。已知报告基因GUS表达产物能催化无色物质K呈现蓝色，则排除假阳性的原理是：报告基因GUS在________细胞中表达，而在农杆菌中不表达，因此用无色物质K处理上述能正常生长的愈伤组织，假阳性的农杆菌________(填“出现”或“不出现”)蓝色。 【第 12023 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
【参考答案】(1)DNA连接 不能 PCR (2)①a、d Ca2+ ②1和4
(3)除草剂 真核 不出现 抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。
(1)构建含除草剂抗性基因的表达载体，传统的方法是目的基因通过限制酶和____________酶与载体进行重组。载体上目的基因插入位点的限制酶识别序列________(填“能”或“不能”)出现在目的基因内部，可通过________技术在目的基因两侧添加相应限制酶识别序列，以便构建表达载体。
(2)为了减少限制酶识别序列的影响，科研人员研发了新的DNA重组方法：无缝克隆技术(图2)，其中InFusion酶可以将任何具有相同15 bp末端序列的线性DNA分子进行连接，类似同源重组。
①科研人员希望应用以上方法构建含有A和GUS基因的重组DNA分子，首先获得了3种DNA分子如图3，然后混合进行InFusion反应。
如果引物2上额外添加的片段对应GUS基因中加粗的e片段，那么引物1和引物4上额外增加的片段分别对应载体中的片段________。完成重组反应后，将重组表达载体加入经过________处理的农杆菌中。
②为筛选成功转入重组DNA分子的菌落，可以选取引物________扩增目的基因并电泳检测。请在图4中画出阳性菌落的电泳结果。
(3)农杆菌转化愈伤组织时，用含________的选择培养基筛选转化的愈伤组织。转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织(假阳性)也可能在选择培养基上生长。已知报告基因GUS表达产物能催化无色物质K呈现蓝色，则排除假阳性的原理是：报告基因GUS在________细胞中表达，而在农杆菌中不表达，因此用无色物质K处理上述能正常生长的愈伤组织，假阳性的农杆菌________(填“出现”或“不出现”)蓝色。 |
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 59 | 红细胞生成素(EPO)是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，某科研团队采用基因工程培育转基因羊作为乳腺生物反应器，使其能合成EPO。下列有关叙述正确的是
A．构建表达载体时需将EPO基因插入乳腺蛋白基因启动子的下游
B．一般情况下，该转基因羊中的EPO基因只在羊的乳腺细胞中表达
C．用显微注射技术将含EPO基因的表达载体导入羊的乳腺细胞中可合成并提取EPO
D．用PCR扩增人EPO基因时，需要一段已知的EPO基因核苷酸序列 【第 12021 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
红细胞生成素(EPO)是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，某科研团队采用基因工程培育转基因羊作为乳腺生物反应器，使其能合成EPO。下列有关叙述正确的是
A．构建表达载体时需将EPO基因插入乳腺蛋白基因启动子的下游
B．一般情况下，该转基因羊中的EPO基因只在羊的乳腺细胞中表达
C．用显微注射技术将含EPO基因的表达载体导入羊的乳腺细胞中可合成并提取EPO
D．用PCR扩增人EPO基因时，需要一段已知的EPO基因核苷酸序列 |
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| 题型：单选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 60 | 白细胞介素2(IL2)参与移植排斥反应，是免疫调节因子，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。科研人员将含IL2基因的DNA片段和质粒pPIC9K(部分结构如图所示)构建成重组质粒，并导入酵母菌GS115(组氨酸缺陷菌株)中，筛选到了能分泌IL2的工程菌株。下列叙述错误的是
A．组氨酸合成基因可作为标记基因筛选导入重组质粒的酵母菌细胞
B．构建重组质粒时可选用AvrⅡ和NotⅠ切割目的基因和pPIC9K质粒
C．重组质粒导入酵母菌GS115前，需要先用Ca2+处理酵母菌GS115细胞
D．抑制IL2基因的表达可在一定程度上减轻机体器官移植后的免疫排斥反应 【第 12020 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
白细胞介素2(IL2)参与移植排斥反应，是免疫调节因子，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。科研人员将含IL2基因的DNA片段和质粒pPIC9K(部分结构如图所示)构建成重组质粒，并导入酵母菌GS115(组氨酸缺陷菌株)中，筛选到了能分泌IL2的工程菌株。下列叙述错误的是
A．组氨酸合成基因可作为标记基因筛选导入重组质粒的酵母菌细胞
B．构建重组质粒时可选用AvrⅡ和NotⅠ切割目的基因和pPIC9K质粒
C．重组质粒导入酵母菌GS115前，需要先用Ca2+处理酵母菌GS115细胞
D．抑制IL2基因的表达可在一定程度上减轻机体器官移植后的免疫排斥反应 |
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