| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第3节 基因工程的应用 | | |  |
| 【试题】 41 | D基因中含两种限制酶BamHⅠ和Msp Ⅰ (5′C↓CGG3′)的酶切位点，Hpa Ⅱ和Msp Ⅰ酶切位点相同，酶切位点处的胞嘧啶可能被甲基化，Hpa Ⅱ对胞嘧啶甲基化敏感(即不能切割甲基化的酶切位点)，而Msp Ⅰ对胞嘧啶甲基化不敏感。某种基因型小鼠(Dd)有表型1和表型2两种表型，利用两种表型的小鼠D基因做了三组酶切实验：第一组单独使用BamHⅠ，第二组使用BamHⅠ＋Msp Ⅰ，第三组使用BamHⅠ＋Hpa Ⅱ；每组完全酶切产物(每一个酶切位点均被切割)通过电泳分离并使用探针得到杂交带，结果如图所示。下列叙述正确的是
A．该种小鼠(Dd)有两种表型可能与D基因甲基化程度不同影响了基因的表达有关
B．若经过第一组处理后均可得到8.9kb的基因片段(包含探针)，则说明经过第一组处理后的D基因的酶切位点均没有被甲基化
C．若控制表型1的D基因经过第二组和第三组处理后的酶切结果分别是3.5 kb和8.9 kb，则说明控制表型1的D基因中的4个Msp Ⅰ酶切位点均被甲基化
D．若控制表型2的D基因经过第三组处理后的酶切结果介于3.5kb和8.9kb之间，则说明D基因中最多有3个Hpa Ⅱ酶切位点被甲基化  【第 12202 题】 【题型】：多选题 【章节】：第3节 基因工程的应用
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
D基因中含两种限制酶BamHⅠ和Msp Ⅰ (5′C↓CGG3′)的酶切位点，Hpa Ⅱ和Msp Ⅰ酶切位点相同，酶切位点处的胞嘧啶可能被甲基化，Hpa Ⅱ对胞嘧啶甲基化敏感(即不能切割甲基化的酶切位点)，而Msp Ⅰ对胞嘧啶甲基化不敏感。某种基因型小鼠(Dd)有表型1和表型2两种表型，利用两种表型的小鼠D基因做了三组酶切实验：第一组单独使用BamHⅠ，第二组使用BamHⅠ＋Msp Ⅰ，第三组使用BamHⅠ＋Hpa Ⅱ；每组完全酶切产物(每一个酶切位点均被切割)通过电泳分离并使用探针得到杂交带，结果如图所示。下列叙述正确的是
A．该种小鼠(Dd)有两种表型可能与D基因甲基化程度不同影响了基因的表达有关
B．若经过第一组处理后均可得到8.9kb的基因片段(包含探针)，则说明经过第一组处理后的D基因的酶切位点均没有被甲基化
C．若控制表型1的D基因经过第二组和第三组处理后的酶切结果分别是3.5 kb和8.9 kb，则说明控制表型1的D基因中的4个Msp Ⅰ酶切位点均被甲基化
D．若控制表型2的D基因经过第三组处理后的酶切结果介于3.5kb和8.9kb之间，则说明D基因中最多有3个Hpa Ⅱ酶切位点被甲基化 |
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| 题型：简答题 难度值：1 [0] 知识点：第3节 基因工程的应用 | | | |
| 【试题】 42 | COR基因是植物的冷调节基因，其编码的亲水性多肽能保护细胞免受冻害，具有提高抗寒性的作用。转录因子CBF(由CBF基因控制合成)能够特异性结合下游的靶基因启动子区，激活COR基因的表达。将不同植物的COR基因和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，转入植物体内能大幅提高植物的抗寒性。在构建基因表达载体时，需要根据载体和目的基因上的限制酶切割位点选择不同的限制酶。当遇到平末端和黏性末端无法连接时，可利用Klenow酶特有的与DNA聚合酶作用相同的特性，将黏性末端补平后再与平末端连接。
(1)研究小组获取了一段包含CBF基因的长DNA片段，根据已知CBF基因序列设计了适宜长度的引物A和引物B，在PCR过程中，经过四次循环消耗引物A和引物B共________________个，引物的作用是________________________________________________________________。
(2)现有若干种限制酶，它们的识别序列和切割位点如图所示。为将COR基因表达载体和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，应选用Hed Ⅰ切割COR基因表达载体、用________________切割CBF基因的某一侧后再连接。为实现CBF基因与COR基因表达载体的另一侧连接，共需用到________________种酶。
(3)在转入超量表达载体的转基因植物中，转录因子CBF特异性识别下游的靶基因启动子区后，与______酶结合形成复合体，从而激活COR基因的表达。检测COR基因及其表达过程，可以采用的方法有____________________________________________________________________(至少写出两种)。
(4)科学家在培育的转基因植物中，筛选到一棵AtNUP160植株(atnup160基因的突变体)，AtNUP160基因表达产物能通过干扰核孔复合体的形成，影响RNA的出核转运，进而影响植物的抗寒性。研究发现，AtNUP160植株中CBF基因表达水平降低，影响了COR基因的表达，导致抗寒性减弱。由此推断AtNUP160植株抗寒性减弱的机理是______________________________。 【第 12201 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
【参考答案】(1)30 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 (2)Mun Ⅰ 4 (3)RNA聚合 PCR、抗原－抗体杂交、在个体水平检测植株的抗寒性
(4)AtNUP160植株中AtNUP160基因的表达产物影响核孔复合体的形成，使得COR基因转录形成的mRNA无法转运出核，AtNUP160植株中转录因子CBF合成减少，导致COR基因转录减少，最终使COR基因转录出的mRNA在细胞质中处于较低水平，产生的亲水性多肽减少，植物抗寒性减弱 COR基因是植物的冷调节基因，其编码的亲水性多肽能保护细胞免受冻害，具有提高抗寒性的作用。转录因子CBF(由CBF基因控制合成)能够特异性结合下游的靶基因启动子区，激活COR基因的表达。将不同植物的COR基因和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，转入植物体内能大幅提高植物的抗寒性。在构建基因表达载体时，需要根据载体和目的基因上的限制酶切割位点选择不同的限制酶。当遇到平末端和黏性末端无法连接时，可利用Klenow酶特有的与DNA聚合酶作用相同的特性，将黏性末端补平后再与平末端连接。
(1)研究小组获取了一段包含CBF基因的长DNA片段，根据已知CBF基因序列设计了适宜长度的引物A和引物B，在PCR过程中，经过四次循环消耗引物A和引物B共________________个，引物的作用是________________________________________________________________。
(2)现有若干种限制酶，它们的识别序列和切割位点如图所示。为将COR基因表达载体和CBF基因组合构建抗寒基因超量表达载体，应选用Hed Ⅰ切割COR基因表达载体、用________________切割CBF基因的某一侧后再连接。为实现CBF基因与COR基因表达载体的另一侧连接，共需用到________________种酶。
(3)在转入超量表达载体的转基因植物中，转录因子CBF特异性识别下游的靶基因启动子区后，与______酶结合形成复合体，从而激活COR基因的表达。检测COR基因及其表达过程，可以采用的方法有____________________________________________________________________(至少写出两种)。
(4)科学家在培育的转基因植物中，筛选到一棵AtNUP160植株(atnup160基因的突变体)，AtNUP160基因表达产物能通过干扰核孔复合体的形成，影响RNA的出核转运，进而影响植物的抗寒性。研究发现，AtNUP160植株中CBF基因表达水平降低，影响了COR基因的表达，导致抗寒性减弱。由此推断AtNUP160植株抗寒性减弱的机理是______________________________。 |
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| 题型：简答题 难度值：1 [0] 知识点：第3节 基因工程的应用 | | | |
| 【试题】 43 | 钙依赖蛋白激酶(CDPK)在植物的信号传导和提高植物抗性方面发挥着重要作用。科学家通过将CDPK基因导入拟南芥(双子叶植物)中，来获得具有抗性的新品种。如图为某种质粒表达载体和含CDPK基因的DNA片段示意图，图中标记了限制酶的切割位点。据此回答下列问题：
(1)通过基因工程，将CDPK基因导入拟南芥中，获得具有抗性的新品种的育种原理是____________________。为了使CDPK基因插入质粒中，应选取____________________(两种限制性内切核酸酶)分别切割质粒和含目的基因的DNA片段。
(2)利用PCR可获得大量的CDPK基因，PCR扩增的第一步：用微量移液器在微量离心管中加入缓冲液、4种脱氧核苷酸的等量混合液、水、还需要加入________________________。PCR的产物一般通过琼脂凝胶电泳来鉴定，在凝胶中的DNA分子的迁移速率与_______________有关。
(3)将CDPK基因导入拟南芥细胞通常采用的方法是_________________________________。
(4)检测CDPK基因是否成功表达的方法是______________________，若有杂交带出现，表明已产生了CDPK。 【第 12200 题】 【题型】：简答题 【章节】：第3节 基因工程的应用
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
【参考答案】(1)基因重组 Smal Ⅰ和Xba Ⅰ (2)TaqDNA聚合酶，两种引物和模板DNA 凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象 (3)农杆菌转化法 (4)抗原—抗体杂交 钙依赖蛋白激酶(CDPK)在植物的信号传导和提高植物抗性方面发挥着重要作用。科学家通过将CDPK基因导入拟南芥(双子叶植物)中，来获得具有抗性的新品种。如图为某种质粒表达载体和含CDPK基因的DNA片段示意图，图中标记了限制酶的切割位点。据此回答下列问题：
(1)通过基因工程，将CDPK基因导入拟南芥中，获得具有抗性的新品种的育种原理是____________________。为了使CDPK基因插入质粒中，应选取____________________(两种限制性内切核酸酶)分别切割质粒和含目的基因的DNA片段。
(2)利用PCR可获得大量的CDPK基因，PCR扩增的第一步：用微量移液器在微量离心管中加入缓冲液、4种脱氧核苷酸的等量混合液、水、还需要加入________________________。PCR的产物一般通过琼脂凝胶电泳来鉴定，在凝胶中的DNA分子的迁移速率与_______________有关。
(3)将CDPK基因导入拟南芥细胞通常采用的方法是_________________________________。
(4)检测CDPK基因是否成功表达的方法是______________________，若有杂交带出现，表明已产生了CDPK。 |
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 44 | 如图为DNaseI (一种消化DNA的内切核酸酶)足迹法示意图，该方法可鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上的结合位点，下列有关叙述正确的是
A．DNaseI作用于DNA的氢键和磷酸二酯键
B．加入的蛋白质可保护相应DNA序列不受DNaseI攻击
C．图中①处的空白区域是蛋白质与DNA结合后留下的“足迹”
D．该方法可找到与特异性DNA结合的目标蛋白且能确定目标蛋白结合的碱基 【第 12199 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
如图为DNaseI (一种消化DNA的内切核酸酶)足迹法示意图，该方法可鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上的结合位点，下列有关叙述正确的是
A．DNaseI作用于DNA的氢键和磷酸二酯键
B．加入的蛋白质可保护相应DNA序列不受DNaseI攻击
C．图中①处的空白区域是蛋白质与DNA结合后留下的“足迹”
D．该方法可找到与特异性DNA结合的目标蛋白且能确定目标蛋白结合的碱基 |
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 45 | 下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。下列说法正确的是
A．在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌
B．在含氨苄青霉素的培养基上，能生长的是导入了重组质粒的细菌
C．在含氨苄青霉素的培养基上能生长，但在含四环素的培育基不能生长的细菌是导入了重组质粒的细菌
D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 【第 12198 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。下列说法正确的是
A．在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌
B．在含氨苄青霉素的培养基上，能生长的是导入了重组质粒的细菌
C．在含氨苄青霉素的培养基上能生长，但在含四环素的培育基不能生长的细菌是导入了重组质粒的细菌
D．目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 |
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| 题型：单选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 46 | 限制酶BamHI和BglⅡ是两种常见的工具酶，它们的识别序列及切割位点依次为G↓GATCC和A↓GATCT。研究中用BamHI切割DNA获得目的基因，用BglⅡ切割质粒，并连接得到重组质粒，下列相关叙述错误的是
A.酶切过程中，需控制好酶浓度、温度和反应时间等因素
B.目的基因经限制酶BamHI切割后形成的黏性末端是-CTAG-
C.分别用两种限制酶切割，保证了目的基因定向插入质粒
D.经两种酶处理得到的重组质粒不能再被这两种酶所识别 【第 12040 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
限制酶BamHI和BglⅡ是两种常见的工具酶，它们的识别序列及切割位点依次为G↓GATCC和A↓GATCT。研究中用BamHI切割DNA获得目的基因，用BglⅡ切割质粒，并连接得到重组质粒，下列相关叙述错误的是
A.酶切过程中，需控制好酶浓度、温度和反应时间等因素
B.目的基因经限制酶BamHI切割后形成的黏性末端是-CTAG-
C.分别用两种限制酶切割，保证了目的基因定向插入质粒
D.经两种酶处理得到的重组质粒不能再被这两种酶所识别
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| 题型：多选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 47 | 检测发现，转入大肠杆菌的蛋白M基因表达效率很低,研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好,因而设计了与蛋白 M 基因结合的两对引物（引物B和引物C中都替换了一个碱基），并按图示方式依次进行了4次PCR，以得到定点突变的新的蛋白M基因。这4次PCR应该选择的引物，正确的是
A.PCR1--引物A和引物B
B.PCR2--引物C和引物 D
C.PCR3--引物B和引物C
D.PCR4--引物A和引物 D
【第 12039 题】 【题型】：多选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
检测发现，转入大肠杆菌的蛋白M基因表达效率很低,研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好,因而设计了与蛋白 M 基因结合的两对引物（引物B和引物C中都替换了一个碱基），并按图示方式依次进行了4次PCR，以得到定点突变的新的蛋白M基因。这4次PCR应该选择的引物，正确的是
A.PCR1--引物A和引物B
B.PCR2--引物C和引物 D
C.PCR3--引物B和引物C
D.PCR4--引物A和引物 D
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| 题型：简答题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 48 | 二苯乙烯苷是我国传统药材何首乌特有的药效成分，具有抗氧化、清除自由基等功效。合成二苯乙烯苷的关键酶是芪合酶（STS），为获得大量的STS，研究人员利用质粒（如图2）将STS基因（如图1）转化到大肠杆菌细胞内进行表达。回答下列问题：
(1)采用_________技术可以快速、大量获得目的基因，据图1分析，利用该技术扩增STS基因时，应选择的引物是________。
(2)为使STS基因与质粒正确连接，需在所选引物的_______（填“3”或“5’”）端分别增加相应限制酶的酶切位点，同时选用__________两种限制酶切割质粒。
(3)启动子是_______识别和结合的部位。很多启动子具有物种特异性，在图2质粒中插入STS基因，其上游启动子应选择_______（填写字母）。
A．何首乌启动子 B．大肠杆菌启动子 C．农杆菌启动子
(4)可将转化后的大肠杆菌接种到含________的培养基上进行筛选。能在该培养基上生长的大肠杆菌是否一定含有STS基因?请判断并说明理由：________。
(5)科研人员利用相关技术替换了STS某个位点的氨基酸，提高了STS的抗氧化能力，该技术属于_________。 【第 12037 题】 【题型】：简答题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
【参考答案】(1)PCR 引物2 和引物 3
(2)5' XhoI和 NdeI
(3)RNA聚合酶 B
(4)氨苄青霉素 不一定，含氨苄青霉素抗性基因的未重组载体(空质粒)也可导入大肠杆菌，使大肠杆菌在培养基上形成菌落
(5)蛋白质工程
二苯乙烯苷是我国传统药材何首乌特有的药效成分，具有抗氧化、清除自由基等功效。合成二苯乙烯苷的关键酶是芪合酶（STS），为获得大量的STS，研究人员利用质粒（如图2）将STS基因（如图1）转化到大肠杆菌细胞内进行表达。回答下列问题：
(1)采用_________技术可以快速、大量获得目的基因，据图1分析，利用该技术扩增STS基因时，应选择的引物是________。
(2)为使STS基因与质粒正确连接，需在所选引物的_______（填“3”或“5’”）端分别增加相应限制酶的酶切位点，同时选用__________两种限制酶切割质粒。
(3)启动子是_______识别和结合的部位。很多启动子具有物种特异性，在图2质粒中插入STS基因，其上游启动子应选择_______（填写字母）。
A．何首乌启动子 B．大肠杆菌启动子 C．农杆菌启动子
(4)可将转化后的大肠杆菌接种到含________的培养基上进行筛选。能在该培养基上生长的大肠杆菌是否一定含有STS基因?请判断并说明理由：________。
(5)科研人员利用相关技术替换了STS某个位点的氨基酸，提高了STS的抗氧化能力，该技术属于_________。
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| 题型：单选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 49 | 乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量；酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为通过双酶切构建重组质粒的过程。GTG为原核生物偏好的起始密码子编码序列，ATG为真核生物偏好的起始密码子编码序列。下列说法正确的是
A．引物2的3'端序列应包含XbaI的识别序列
B．重组质粒以能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体
C．PCR反应时，缓冲液中一般要添加Ca 2+来激活相关酶
D．引物1的5'端序列应考虑将GTG改为ATG 【第 12036 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量；酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌内催化乳酸生成的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的酵母工程菌株。下图为通过双酶切构建重组质粒的过程。GTG为原核生物偏好的起始密码子编码序列，ATG为真核生物偏好的起始密码子编码序列。下列说法正确的是
A．引物2的3'端序列应包含XbaI的识别序列
B．重组质粒以能合成尿嘧啶的酵母菌株为受体
C．PCR反应时，缓冲液中一般要添加Ca2+来激活相关酶
D．引物1的5'端序列应考虑将GTG改为ATG
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| 题型：单选题 难度值：1 [0] 知识点：第2节 基因工程的基本操作.. | | | |
| 【试题】 50 | 脱氧核苷三磷酸（dNTP）和双脱氧核苷三磷酸（ddNTP、ddN—Pα~Pβ~Pγ）结构类似，两者的区别是ddNTP脱氧核糖第3位碳原子上的羟基被氢原子取代。DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。现有一些序列为5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子单链片段，拟通过PCR获得被32P标记且3’端为碱基A的不同长度的子链DNA。在反应管中加入单链模板、引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+及缓冲溶液。下列叙述正确的是
A．反应底物是dCTP、dGTP、dTTP和γ位32P标记的ddATP
B．TaqDNA聚合酶催化磷酸二酯键的形成，并需要Mg2+激活
C．ddNTP与dNTP竞争脱氧核苷酸链的3’末端和5’末端
D．实验中可得到4种不同长度被32P标记且3’端为碱基A的子链DNA
【第 12035 题】 【题型】：单选题 【章节】：第2节 基因工程的基本操作程序
【特大】 【较大】 【适中】 【较小】 【特小】 【显示答案】 【关闭答案】 ﹤﹤上题 下题﹥﹥ CLOSE
脱氧核苷三磷酸（dNTP）和双脱氧核苷三磷酸（ddNTP、ddN—Pα~Pβ~Pγ）结构类似，两者的区别是ddNTP脱氧核糖第3位碳原子上的羟基被氢原子取代。DNA复制时，ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点，并终止DNA片段的延伸。现有一些序列为5’—GCCTAAGATCGTA—3’的DNA分子单链片段，拟通过PCR获得被32P标记且3’端为碱基A的不同长度的子链DNA。在反应管中加入单链模板、引物、底物、TaqDNA聚合酶、Mg2+及缓冲溶液。下列叙述正确的是
A．反应底物是dCTP、dGTP、dTTP和γ位32P标记的ddATP
B．TaqDNA聚合酶催化磷酸二酯键的形成，并需要Mg2+激活
C．ddNTP与dNTP竞争脱氧核苷酸链的3’末端和5’末端
D．实验中可得到4种不同长度被32P标记且3’端为碱基A的子链DNA
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